[發明專利]聚苯乙烯熒光納米顆粒及其制備和應用

無效

• 申請號: 201110439523.2
• 申請日: 2011-12-26
• 公開（公告）號: CN103172941A
• 公開（公告）日: 2013-06-26
• 發明（設計）人: 吳俊清;任媛媛;楊揮
• 申請（專利權）人: 蘇州新波生物技術有限公司
• 主分類號: C08L25/08
• 分類號: C08L25/08;C08K5/00;C09K11/06;C08F212/08;C08F220/06;C08F220/14;C08F220/56;C08F2/26;G01N33/545
• 代理公司: 上海浦一知識產權代理有限公司 31211
• 代理人: 高月紅

技術領域

本發明涉及一種聚苯乙烯納米熒光顆粒及其制備和應用，特別是涉及一種長壽命的聚苯乙烯熒光納米顆粒及其制備和在免疫層析中的應用。

背景技術

如何在不依賴大型儀器設備的條件下通過簡單的操作實現快速、準確地定量分析，一直是免疫診斷領域研究的課題，這種需求促使各種能在患者身邊進行的醫學檢驗(POCT)產品不斷推出。

目前，常規的免疫檢測主要包括各種發光免疫分析(LIA)、放射免疫分析(RIA)和酶標免疫分析(EIA)。RIA和EIA均為成熟、穩定的免疫檢測方法，直到現在，RIA和EIA仍在免疫診斷領域占有重要位置。但RIA所用標記物(常用¹²⁵I)的可檢測性有限，很難實現超靈敏分析；其基于衰變的放射性行為也使其難以建立均相免疫分析方法；更主要的是，其較短的半衰期使RIA試劑難以長時間保存，加上其涉及放射性廢物處理、不易實現自動化等缺點，RIA正逐漸被非放射免疫分析取代；EIA作為一種重要的非放射性免疫分析方法目前仍在廣泛使用；基于OD值檢測的EIA具有測量范圍窄、分析靈敏度較低的缺點；而以酶為初始標記物、以化學發光或熒光物質為底物的酶放大發光免疫分析克服了以上缺點，但該方式需要一酶促反應；以化學發光物質為標記、以閃爍光檢測為特點的LIA，由于其對光信號的引發和收集有嚴格的要求，對檢測儀器的要求很高，目前還國產的這類發光測定儀市場上還沒有；由于上述原因，近年來時間分辨熒光免疫分析(TRFIA)發展迅速；TRFIA具有很高的分析靈敏度、寬闊的測量范圍、優良的分析精密性和對多個待測物同時檢測的能力，成為方法學上頗具優勢的非放射免疫分析技術之一。盡管如此，所有上述常規免疫檢測體系均要求使用大型的儀器設備，操作步驟比較復雜，檢測成本較高，不適合在家庭、社區、急診實驗室和其它現場使用。

隨著生活水平的提高，人們越來越關注自身的健康狀況，許多適合于自測的待測物指標具有很大的市場需求，如排卵監測、糖化血紅蛋白的測定，此外，一些適合于急診的項目，如心臟標志物產品，傳染病系列產品，毒品系列產品，也需要采用定量、快速、隨機、操作簡單的免疫檢測模式；此類檢測同樣也適合于探礦、軍事、食品以及社區和小型醫院使用，這類檢測通常稱之為Point?Of?Care測試。

采用膠體金為標記的免疫層析是Point?of?Care測試的常用模式，目前此類產品多為定性檢測，但越來越多的檢測需要準確測定樣本中的待測物濃度，如心肌梗塞標志物CTn-I(心肌肌鈣蛋白I)、心臟功能評估標志物BNP(腦鈉肽)等。福州大學的杜民、楊富文等通過分析影響金標記免疫層析定量的各種因素，如生化噪聲、光噪聲、電噪聲等，建立了光譜峰曲線的數學表達模式，利用光電檢測系統將納米金免疫層析試條的色譜信號轉換為光譜信號，實現了金標記免疫層析的定量檢測(杜民，楊富文；基于光電檢測與信息處理技術的納米金免疫層析試條定量測試的研究，福州大學博士學位論文，2005/05)，但該方法檢測的是納米金產生的色譜信號，存在分析靈敏度較低、測量范圍窄的缺點，該方法的測量范圍一般小于二個數量級，而臨床上有意義的待測物濃度范圍往往在二個數量級以上，因此對于高濃度樣本，使用該定量分析體系需要稀釋樣本，這不僅增加的操作步驟，還可能引入實驗誤差。此外，對于以納米金為標記的定量/半定量免疫層析，已經報道的還有張慧、唐江萍等人發明的色帶遞減法免疫層析(中國專利公開號：CN?1381729A)，李文平、何湘蓉發明的半定量免疫層析(中國專利公開號：CN?1403818A)，和美國拜爾公司R.G索馬發明的定量免疫層析檢測方法(中國專利公開號：CN?1146557A)。

靈敏度低、測量范圍窄是以納米金為標記的定量/半定量免疫層析難以避免的弊端。以熒光納米微粒為標記，通過檢測熒光信號尤其是稀土離子鰲合物的長壽命熒光信號，將大大改善免疫層析檢測的分析靈敏度和測量范圍，該方法測量范圍可達到三個以上數量級，可建立綜合性能更優越的快速、定量Point?of?Care檢測體系。