[發(fā)明專利]一種堿性蛋白酶的生產(chǎn)方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110437777.0
• 申請日: 2011-12-23
• 公開（公告）號(hào): CN102517268A
• 公開（公告）日: 2012-06-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 路福平;劉逸寒;劉敏堯;劉靚;薄嘉鑫;王春霞;王建玲
• 申請（專利權(quán)）人: 天津科技大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N9/54
• 分類號(hào): C12N9/54;C12R1/07
• 代理公司: 天津盛理知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 12209
• 代理人: 王來佳

1.一種堿性蛋白酶的生產(chǎn)方法，其特征在于：生產(chǎn)過程采用補(bǔ)料分批發(fā)酵的方法。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的堿性蛋白酶的生產(chǎn)方法，其特征在于：發(fā)酵采用清液發(fā)酵。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的堿性蛋白酶的生產(chǎn)方法，其特征在于：發(fā)酵所用微生物為嗜堿芽孢桿菌Bacillus?alcalophilus?Y-22，保藏編號(hào)為：CGMCC?No.5313，保藏單位為：中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的堿性蛋白酶的生產(chǎn)方法，其特征在于：發(fā)酵步驟如下：

(1)種子的培養(yǎng)：從斜面上挑取一環(huán)新培養(yǎng)的嗜堿性芽孢桿菌Y-22接入種子培養(yǎng)液中(50mL種子培養(yǎng)基/250mL三角瓶)，200r/min，34℃培養(yǎng)12h；

(2)發(fā)酵罐培養(yǎng)：5％v/v接種量轉(zhuǎn)接至液體發(fā)酵培養(yǎng)基；溫度：34℃；轉(zhuǎn)速：250～450r/min；通風(fēng)量：1∶0.5～1∶1.5。發(fā)酵過程中自動(dòng)流加氨水及20％v/v的鹽酸，使發(fā)酵液pH值維持在7.0；

(3)補(bǔ)料分批發(fā)酵：在堿性蛋白酶高產(chǎn)菌株發(fā)酵產(chǎn)堿性蛋白酶的過程中按一定的比生長速率流加補(bǔ)料培養(yǎng)基，發(fā)酵10-30小時(shí)控制比生長速率0.12h^-1，30-55小時(shí)控制比生長速率0.6h^-1。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的堿性蛋白酶的生產(chǎn)方法，其特征在于：所用發(fā)酵培養(yǎng)基配方為g/L：酵母浸粉17，麥芽糊精100g/L、檸檬酸鈉3g/L、氯化鈣2.6g/L、K₂HPO₄18g/L、pH自然，標(biāo)準(zhǔn)棉籽餅粉水解液150mL/L。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的堿性蛋白酶的生產(chǎn)方法，其特征在于：所用補(bǔ)料培養(yǎng)基配方為：麥芽糊精600g/L、檸檬酸鈉3g/L、氯化鈣2.6g/L、K₂HPO₄18g/L、pH自然，標(biāo)準(zhǔn)棉籽餅粉水解液800mL/L。

7.根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的堿性蛋白酶的生產(chǎn)方法，其特征在于：所述標(biāo)準(zhǔn)棉籽餅粉水解液為棉籽餅粉經(jīng)物理作用及酶水解后得到的上清液。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的堿性蛋白酶的生產(chǎn)方法，其特征在于：所述標(biāo)準(zhǔn)棉籽餅粉水解液的制備方法步驟如下：

(1)棉籽餅粉加干重2-5倍的水，高壓蒸煮20-30分鐘，除去對菌體生長有害的棉酚；

(2)加入棉籽餅粉干重1-3％w/w復(fù)合酶制劑，45℃，120r/min，攪拌處理120分鐘；

(3)板框過濾，濾液即為棉籽餅粉酶水解液；

(4)將棉籽餅粉酶水解液中蛋白濃度稀釋為25g/L，即為標(biāo)準(zhǔn)棉籽餅粉酶水解液。

9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的堿性蛋白酶的生產(chǎn)方法，其特征在于：所述復(fù)合酶制劑為蛋白酶、纖維素酶、木聚糖酶和果膠酶的混合物。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的堿性蛋白酶的生產(chǎn)方法，其特征在于：所述復(fù)合酶制劑的復(fù)配比例為蛋白酶∶纖維素酶∶木聚糖酶∶果膠酶＝3∶1.5∶2.5∶2。