[發明專利]一種全反式蝦青素含量測定方法

有效

• 申請號: 201110437754.X
• 申請日: 2011-12-23
• 公開（公告）號: CN102539611A
• 公開（公告）日: 2012-07-04
• 發明（設計）人: 龍祥;萬慶家;胡志祥;張秋玲;史曉晨;楊瑜
• 申請（專利權）人: 云南綠A生物工程有限公司
• 主分類號: G01N30/89
• 分類號: G01N30/89;G01N30/06
• 代理公司: 北京泛華偉業知識產權代理有限公司 11280
• 代理人: 劉丹妮

1.一種測定(3S，3′S)-全反式蝦青素含量的方法，其特征在于，所述方法采用HPLC來測定(3S，3′S)-全反式蝦青素的含量。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，采用高效液相色譜法測定雨生紅球藻及其提取物和制劑中(3S，3′S)-全反式蝦青素含量的方法，該方法包括用二氯甲烷-正己烷溶液提取雨生紅球藻、雨生紅球藻提取物或制劑供試樣品，并進行水解，然后采用反相C18色譜柱，以丙酮-水作為流動相，通過梯度洗脫測定雨生紅球藻、雨生紅球藻提取物或制劑供試樣品中的(3S，3′S)-全反式蝦青素的含量。

3.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述梯度洗脫條件包括以下步驟：

在0至8分鐘內流動相中所含丙酮的體積百分比為81％，水的體積百分比為19％；再于另外的15分鐘丙酮的濃度由81體積％勻速變化至89體積％，水的濃度由19體積％勻速變化至11體積％。

4.根據權利要求1至3中任一項所述的方法，其特征在于，所述雨生紅球藻、雨生紅球藻提取物或雨生紅球藻制劑供試樣品的制備包括以下步驟：

1)以二氯甲烷-正己烷(7∶3)溶液提取樣品中的游離蝦青素及蝦青素酯，得到提取液；

2)將步驟1)得到的提取液以氮氣吹干后用丙酮溶解，然后添加體積比為0.2％的羧基酯脂肪酶溶液在氮氣保護下進行水解處理，即可，優選地，所述羧基酯脂肪酶溶液為0.2μg/mL的羧基酯脂肪酶溶液。

5.根據權利要求1至4中任一項所述的方法，其特征在于，所述高效液相色譜法采用紫外檢測器，檢測波長為476nm。

6.根據權利要求1至5中任一項所述的方法，其特征在于，所述流動相的流速為0.8mL/min。

7.根據權利要求1至6中任一項所述的方法，其特征在于，所述反相C18色譜柱為YMC-Pack?ODS-A?250×4.6mm?L.D?S-5μm色譜柱，檢測柱溫為20℃。

8.根據權利要求1至7中任一項所述的方法，其特征在于，所述采用HPLC高效液相色譜測定(3S，3′S)-全反式蝦青素含量的方法包括以下步驟：

步驟1：取(3S，3′S)-全反式蝦青素標準品進行高效液相色譜檢測，作為(3S，3′S)-全反式蝦青素的標準曲線；

步驟2：將由雨生紅球藻、雨生紅球藻提取物或雨生紅球藻制劑制得的供試樣品進行高效液相色譜檢測；

步驟3：將步驟2所得的高效液相色譜圖譜與步驟1所得(3S，3′S)-全反式蝦青素的標準曲線對比，計算得出雨生紅球藻、雨生紅球藻提取物或雨生紅球藻制劑中(3S，3′S)-全反式蝦青素的含量。

9.根據權利要求8所述的方法，其特征在于，在步驟4中，所述采用高效液相色譜法測定(3S，3′S)-全反式蝦青素含量還包括根據下式計算樣品中(3S，3′S)-全反式蝦青素的含量：

X=(C×250)×100%m×1000000]]>

其中，X表示(3S，3′S)-全反式蝦青素的含量％(w/w)；C表示根據標準曲線計算出的樣品中(3S，3′S)-全反式蝦青素的濃度(μg/mL)；m表示樣品的取樣量(g)。

10.根據權利要求1-9中任一項所述的方法應用于雨生紅球藻、雨生紅球藻提取物及雨生紅球藻制劑(含提取物制劑)中(3S，3′S)-全反式蝦青素含量測定。