[發明專利]一種豬O型口蹄疫合成肽疫苗及其制備方法

無效

• 申請號: 201110437304.0
• 申請日: 2011-12-23
• 公開（公告）號: CN102580076A
• 公開（公告）日: 2012-07-18
• 發明（設計）人: 劉德輝;何俊
• 申請（專利權）人: 廣州自遠生物科技有限公司
• 主分類號: A61K39/135
• 分類號: A61K39/135;C12N15/42;A61P31/14
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 陳衛

1.一種豬O型口蹄疫合成肽疫苗，其特征在于其氨基酸序列如SEQ?ID?NO:1所示，基因序列如SEQ?ID?NO:2所示；所述氨基酸序列采用的是豬O型口蹄疫VP1蛋白中具有抗原性的141-160位及200-213位氨基酸肽段，并將其組成多拷貝的串聯結構，在肽段連接處加入氨基酸多肽作為接頭；抗原多肽采用如下串聯結構：Y-M-X-N-Y，其中“X”和“Y”分別代表豬O型口蹄疫VP1蛋白141-160、200-213位氨基酸肽段；“M”和“N”分別代表“Pro-Gly”二肽接頭及十一肽接頭，所述十一肽接頭的氨基酸序列如SEQ?ID?NO:3所示。

2.權利要求1所述豬O型口蹄疫合成肽疫苗的制備方法，其特征在于包括如下步驟：

（1）應用重組DNA技術，合成編碼豬O型口蹄疫合成肽的DNA序列，構建pGAPZαA-SP表達載體；

（2）重組表達載體pGAPZαA-SP轉化宿主細胞畢赤酵母中，構建表達工程菌；

（3）發酵培養重組酵母菌，進行表達，表達產物作SDS-PAGE及Western-blot分析鑒定；

（4）表達產物純化，并選用佐劑乳化制成新型的豬O型口蹄疫合成肽疫苗。

3.根據權利要求2所述豬O型口蹄疫合成肽疫苗的制備方法，其特征在于所述表達載體為畢赤酵母表達載體。

4.根據權利要求2所述豬O型口蹄疫合成肽疫苗的制備方法，其特征在于所述步驟（3）具體為用滅菌牙簽細挑篩選到的具有Zeocin?抗性的單菌落，挑于5?mL?的YPD?液體培養基中進行一級培養，28℃-30℃，200?r/min?振蕩過夜，至OD600=2-6，此時細胞處于對數生長期；取1?mL一級培養液，重懸于30?mL?的YPD?中，繼續振蕩培養，用四層干凈的紗布外加兩層報紙包扎。

5.培養72小時，3000?r/min?離心5?min，收集培養液上清，即得純化蛋白。

6.根據權利要求2所述豬O型口蹄疫合成肽疫苗的制備方法，其特征在于所述步驟（4）中所述佐劑為進口油乳佐劑。