[發明專利]一種納米凝血酶及其制備方法

在審

• 申請號: 201110436302.X
• 申請日: 2011-12-22
• 公開（公告）號: CN103169957A
• 公開（公告）日: 2013-06-26
• 發明（設計）人: 聶廣軍;李素萍;吳雁;張嘉坤;趙穎
• 申請（專利權）人: 國家納米科學中心
• 主分類號: A61K38/48
• 分類號: A61K38/48;A61K47/36;A61K47/26;A61K9/14;A61P7/04
• 代理公司: 北京潤平知識產權代理有限公司 11283
• 代理人: 王浩然;周建秋

技術領域

本發明涉及一種止血藥物凝血酶新劑型及其制備，具體涉及一種納米凝血酶及其制備方法。

背景技術

凝血酶(thrombin)又稱凝血因子IIa，是一種專一性很強的絲氨酸蛋白酶，是機體凝血系統的一種關鍵酶。它一方面可直接作用于纖維蛋白原，使之轉變為纖維蛋白，最后導致纖維蛋白凝膠的生成，另一方面則通過受體介導途徑誘導血小板活化，活化的血小板發生粘附、釋放和聚集反應，最終導致血小板血栓的形成。因此，凝血酶可作用于凝血過程的最后環節，在不需要其它眾多凝血因子參與的情況下，使血液快速凝固、填塞出血點而達到止血的目的。由于其止血快，無副作用等優點，目前其干粉或生理鹽水溶液已作為一種止血藥廣泛應用于創傷和臨床手術創面以及消化道黏膜等部位的出血與滲血，止血效果好，療效確切。

但在臨床應用中存在一些問題，例如一是凝血酶必須在10℃以下保存，室溫保存其生理活性易丟失，穩定性較差；其次，凝血酶的本質是蛋白質，進入體內很容易被降解，尤其是治療上消化道出血時，需多次口服給藥；三是由于其強的促凝活性，不適于靜脈注射，應用范圍有限；四是稍大劑量應用時，具有神經毒性。

為了克服凝血酶直接使用時的上述問題，目前開發出一些包載凝血酶藥物，但有的包載凝血酶的載體需溶于有機溶劑中來制備包載凝血酶，有的包載凝血酶的載體溶液呈酸性，有的包載凝血酶需在高溫下制備，而有機溶劑、酸性溶液、高溫對凝血酶的活性均有較大影響，從而降低制得的包載凝血酶的藥效。

因此，目前很有必要開發一種對所包載的凝血酶的活性無較大影響，穩定性好、安全高效、使用范圍廣泛的凝血酶新劑型。

發明內容

本發明的目的是為了克服現有包載凝血酶藥物的藥效較低的缺陷，提供一種新的納米凝血酶及其制備方法。

本發明的發明人在研究中意外發現，核殼結構的納米凝血酶，核為凝血酶，殼為由水溶性聚陰離子和季銨化殼聚糖的陽離子交聯形成的納米粒子，對凝血酶的活性無較大影響，且穩定性好、安全高效、使用范圍廣泛。因此，為了實現上述目的，一方面，本發明提供了一種納米凝血酶，其特征在于，所述納米凝血酶為核殼結構，所述核為凝血酶，所述殼為由水溶性聚陰離子和季銨化殼聚糖的陽離子交聯形成的納米粒子。

優選地，所述納米粒子的粒徑為150-210nm。

優選地，所述納米凝血酶的包封率為50-78％。

另一方面，本發明還提供了一種納米凝血酶的制備方法，所述方法包括：

(1)將季銨化殼聚糖水溶液與凝血酶水溶液接觸得到混合溶液，季銨化殼聚糖水溶液和凝血酶水溶液的用量為，每9mg的季銨化殼聚糖對應2-10U的凝血酶；

(2)在18-25℃持續攪拌狀態下，向所述混合溶液中勻速滴加水溶性聚陰離子水溶液，水溶性聚陰離子水溶液以聚陰離子計，混合溶液以季銨化殼聚糖計，水溶性聚陰離子水溶液與混合溶液的質量比為1∶3-10；

(3)加入水溶性聚陰離子水溶液后在18-25℃下繼續攪拌25-35min，得到納米凝血酶懸液。

優選地，所述方法還包括步驟(4)：將所述納米凝血酶懸液以10000-15000r/min的速度離心，離心后得到的固體即為納米凝血酶。

本發明提供的納米凝血酶，由于采用核殼結構，核為凝血酶，殼為由水溶性聚陰離子和季銨化殼聚糖的陽離子交聯形成的納米粒子，即將凝血酶包載在由水溶性聚陰離子和季銨化殼聚糖的陽離子交聯形成的納米粒子中，水溶性聚陰離子和季銨化殼聚糖的陽離子是通過分子間或分子內交聯反應而形成納米粒子，是一種靜電作用，不涉及熱交聯過程中的高溫及化學交聯過程中的共價鍵形成，對所包載的凝血酶的活性無較大影響；季銨化殼聚糖和水溶性聚陰離子均是水溶性的，且季銨化殼聚糖的水溶液和水溶性聚陰離子的水溶液均為中性或弱堿性，對所包載的凝血酶的活性也無較大影響。因此，本發明提供的納米凝血酶保持了凝血酶的生物活性。

本發明提供的納米凝血酶，由于凝血酶被包載在水溶性聚陰離子和季銨化殼聚糖的陽離子交聯成的納米粒子中，因此可在室溫下穩定保存；活性穩定；具有緩釋功能，適于靜脈注射；藥物作用時間長，生物利用度高；進入體內不容易被降解，降低了用藥劑量；季銨化殼聚糖材料經濟、無毒、生物兼容性好，使本發明提供的納米凝血酶經濟安全；通過對納米粒子表面修飾可制備靶向藥物制劑，本發明提供的納米凝血酶具有良好的藥物開發潛力，具有較高的醫用價值和廣闊的應用前景。

本發明的其他特征和優點將在隨后的具體實施方式部分予以詳細說明。

附圖說明

圖1是本發明提供的納米凝血酶的電鏡照片。