[發明專利]一種柱層析法制備高純甘油磷脂酰乙醇胺的方法

有效

• 申請號: 201110436224.3
• 申請日: 2011-12-23
• 公開（公告）號: CN102532190A
• 公開（公告）日: 2012-07-04
• 發明（設計）人: 劉元法;周麗;張康逸;王興國
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C07F9/10
• 分類號: C07F9/10
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明是一種制備高純甘油磷脂酰乙醇胺(L-alpha?glycerylphosphorylethanolamine，L-α-GPE)的方法，屬于磷脂深加工技術領域。

背景技術

甘油磷脂酰乙醇胺(L-alpha?glycerylphosphorylethanolamine，L-α-GPE)，是磷脂酰乙醇胺(phosphatidylethanolamine，PE)分子上的兩個脂肪酰基完全被分解掉的產物，可用于醫藥行業，作為主要的有效成分，與適當的藥物載體相輔助，用于治療由于大腦退化或腦血管功能不全引起的慢性腦部神經組織綜合癥。其結構式中R基團的結構式為CH₂CH₂NH₂，區別于大豆粉末磷脂的的其他醇解產物，如甘油磷脂酰膽堿(L-α-GPC)、甘油磷脂酰絲氨酸(L-α-GPS)等。由于磷脂組成復雜，其產品的組成也十分的復雜，因而導致甘油磷脂酰乙醇胺(L-α-GPE)的分離比較困難。

柱層析法，采用離子交換樹脂為介質，對反應原料的純度要求不高，工藝十分簡單，所得產品的純度很高，在分離出L-α-GPE得同時，還可以很好的將L-α-GPC從反應混合液中有效地分離出來，而離子交換樹脂來源廣泛，成本較低，因此該法可以適用于工業生產。目前，國內尚未出現有關L-α-GPE的研究報導。

發明內容

本發明的目的是提供一種高純L-α-GPE的制備方法。其特征是以大豆粉末磷脂為原料，在無水甲醇體系中，采用甲醇鈉作為催化劑，反應生成含有L-α-GPE的混合液，然后采用兩種離子交換樹脂柱層析法進行分離純化，以L-α-GPE的純度為主要指標，通過對反應條件、樹脂型號及解吸液進行選擇優化，確定制備純化工藝。

本發明的技術方案：

(1)以大豆粉末磷脂為原料，在無水醇相體系中，采用甲醇鈉催化進行化學醇解反應，反應產物采用蒸發光散射-高效液相色譜法(HPLC-ELSD)檢測其中L-α-GPE的含量，考察反應溫度、反應時間、催化劑添加量和料液比對反應的影響并確定最佳工藝條件。

(2)在確定了醇解反應最佳條件的基礎上，采用靜態吸附和靜態解吸法對樹脂進行篩選。

(3)將選擇的樹脂裝柱后，采用不同的解吸液對柱進行解吸，以L-α-GPE的純度和解吸曲線為主要參考指標，確定出最適解吸液。

本發明的有益效果：

(1)采用柱層析法制備純化甘油磷脂酰乙醇胺，所得L-α-GPE產品的純度超過98％，并同時得到了純度超過95％的GPC產品，屬于開創性研究。

(2)大豆粉末磷脂來源廣泛，目前在食品醫藥行業主要作為乳化劑和輔料，本發明拓展了磷脂的應用范圍。

(3)采用離子交換樹脂作為分離介質，成本較低，工藝簡單，并且樹脂可以通過再生重復利用，具有較高的工業發展前景。

附圖說明

圖1甘油磷酸類化合物的結構式

圖2化學反應后混合溶液的高效液相色譜圖

圖3所得GPE的高效液相色譜圖

圖4所得GPC的高效液相色譜圖

具體實施方式

實施例1

稱取250g大豆粉末磷脂于燒杯中，加入1L無水甲醇，快速攪拌使體系中的粉末磷脂均勻擴散，然后加入甲醇鈉12g，于35℃下攪拌6h，抽濾，所得清液調節pH至9左右。量取200ml甲醇浸泡的D001樹脂，裝柱，400ml甲醇沖洗柱，以1.5mL/min的流速將上述大豆粉末磷脂的醇解溶液上樣，上樣結束后，先用1L甲醇洗脫，然后用pH＝6.78的超純水對柱進行解吸。將此解吸液再次上樣至裝有100mL201×7樹脂的層析柱(400mL水沖洗)中，柱下流出液為GPC水溶液，上樣結束后用水沖洗至GPC完全流出，檢測GPC的純度為97.11％，然后采用1％乙酸解吸，所得解吸液即為GPE水溶液，于60℃下減壓蒸餾，得到淡黃色透明高黏度液體，檢測其純度為99.8％。

實施例2

稱取250g大豆粉末磷脂于燒杯中，加入1.25L無水甲醇，快速攪拌使體系中的粉末磷脂均勻擴散，然后加入甲醇鈉10g，于35℃下攪拌19h，抽濾，所得清液pH至8左右。量取100ml甲醇浸泡的D001樹脂，裝柱，200ml甲醇沖洗柱，以2.0mL/min的流速將上述大豆粉末磷脂的醇解溶液上樣，上樣結束后，先用1L甲醇洗脫，然后用pH＝5.01的超純水對柱進行解吸。將此解吸液再次上樣至裝有200mL201×7樹脂的層析柱(400mL水沖洗)中，柱下流出液為GPC水溶液，上樣結束后用水沖洗至GPC完全流出，檢測GPC的純度為95.72％，然后采用1％乙酸解吸，所得解吸液即為GPE水溶液，于60℃下減壓蒸餾，得到淡黃色透明高黏度液體，檢測其純度為98.37％