[發(fā)明專(zhuān)利]一種柱層析法制備高純甘油磷脂酰乙醇胺的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110436224.3
• 申請(qǐng)日: 2011-12-23
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102532190A
• 公開(kāi)（公告）日: 2012-07-04
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉元法;周麗;張康逸;王興國(guó)
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 江南大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C07F9/10
• 分類(lèi)號(hào): C07F9/10
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• 代理人: 暫無(wú)信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明是一種制備高純甘油磷脂酰乙醇胺(L-alpha?glycerylphosphorylethanolamine，L-α-GPE)的方法，屬于磷脂深加工技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

甘油磷脂酰乙醇胺(L-alpha?glycerylphosphorylethanolamine，L-α-GPE)，是磷脂酰乙醇胺(phosphatidylethanolamine，PE)分子上的兩個(gè)脂肪酰基完全被分解掉的產(chǎn)物，可用于醫(yī)藥行業(yè)，作為主要的有效成分，與適當(dāng)?shù)乃幬镙d體相輔助，用于治療由于大腦退化或腦血管功能不全引起的慢性腦部神經(jīng)組織綜合癥。其結(jié)構(gòu)式中R基團(tuán)的結(jié)構(gòu)式為CH₂CH₂NH₂，區(qū)別于大豆粉末磷脂的的其他醇解產(chǎn)物，如甘油磷脂酰膽堿(L-α-GPC)、甘油磷脂酰絲氨酸(L-α-GPS)等。由于磷脂組成復(fù)雜，其產(chǎn)品的組成也十分的復(fù)雜，因而導(dǎo)致甘油磷脂酰乙醇胺(L-α-GPE)的分離比較困難。

柱層析法，采用離子交換樹(shù)脂為介質(zhì)，對(duì)反應(yīng)原料的純度要求不高，工藝十分簡(jiǎn)單，所得產(chǎn)品的純度很高，在分離出L-α-GPE得同時(shí)，還可以很好的將L-α-GPC從反應(yīng)混合液中有效地分離出來(lái)，而離子交換樹(shù)脂來(lái)源廣泛，成本較低，因此該法可以適用于工業(yè)生產(chǎn)。目前，國(guó)內(nèi)尚未出現(xiàn)有關(guān)L-α-GPE的研究報(bào)導(dǎo)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種高純L-α-GPE的制備方法。其特征是以大豆粉末磷脂為原料，在無(wú)水甲醇體系中，采用甲醇鈉作為催化劑，反應(yīng)生成含有L-α-GPE的混合液，然后采用兩種離子交換樹(shù)脂柱層析法進(jìn)行分離純化，以L(fǎng)-α-GPE的純度為主要指標(biāo)，通過(guò)對(duì)反應(yīng)條件、樹(shù)脂型號(hào)及解吸液進(jìn)行選擇優(yōu)化，確定制備純化工藝。

本發(fā)明的技術(shù)方案：

(1)以大豆粉末磷脂為原料，在無(wú)水醇相體系中，采用甲醇鈉催化進(jìn)行化學(xué)醇解反應(yīng)，反應(yīng)產(chǎn)物采用蒸發(fā)光散射-高效液相色譜法(HPLC-ELSD)檢測(cè)其中L-α-GPE的含量，考察反應(yīng)溫度、反應(yīng)時(shí)間、催化劑添加量和料液比對(duì)反應(yīng)的影響并確定最佳工藝條件。

(2)在確定了醇解反應(yīng)最佳條件的基礎(chǔ)上，采用靜態(tài)吸附和靜態(tài)解吸法對(duì)樹(shù)脂進(jìn)行篩選。

(3)將選擇的樹(shù)脂裝柱后，采用不同的解吸液對(duì)柱進(jìn)行解吸，以L(fǎng)-α-GPE的純度和解吸曲線(xiàn)為主要參考指標(biāo)，確定出最適解吸液。

本發(fā)明的有益效果：

(1)采用柱層析法制備純化甘油磷脂酰乙醇胺，所得L-α-GPE產(chǎn)品的純度超過(guò)98％，并同時(shí)得到了純度超過(guò)95％的GPC產(chǎn)品，屬于開(kāi)創(chuàng)性研究。

(2)大豆粉末磷脂來(lái)源廣泛，目前在食品醫(yī)藥行業(yè)主要作為乳化劑和輔料，本發(fā)明拓展了磷脂的應(yīng)用范圍。

(3)采用離子交換樹(shù)脂作為分離介質(zhì)，成本較低，工藝簡(jiǎn)單，并且樹(shù)脂可以通過(guò)再生重復(fù)利用，具有較高的工業(yè)發(fā)展前景。

附圖說(shuō)明

圖1甘油磷酸類(lèi)化合物的結(jié)構(gòu)式

圖2化學(xué)反應(yīng)后混合溶液的高效液相色譜圖

圖3所得GPE的高效液相色譜圖

圖4所得GPC的高效液相色譜圖

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1

稱(chēng)取250g大豆粉末磷脂于燒杯中，加入1L無(wú)水甲醇，快速攪拌使體系中的粉末磷脂均勻擴(kuò)散，然后加入甲醇鈉12g，于35℃下攪拌6h，抽濾，所得清液調(diào)節(jié)pH至9左右。量取200ml甲醇浸泡的D001樹(shù)脂，裝柱，400ml甲醇沖洗柱，以1.5mL/min的流速將上述大豆粉末磷脂的醇解溶液上樣，上樣結(jié)束后，先用1L甲醇洗脫，然后用pH＝6.78的超純水對(duì)柱進(jìn)行解吸。將此解吸液再次上樣至裝有100mL201×7樹(shù)脂的層析柱(400mL水沖洗)中，柱下流出液為GPC水溶液，上樣結(jié)束后用水沖洗至GPC完全流出，檢測(cè)GPC的純度為97.11％，然后采用1％乙酸解吸，所得解吸液即為GPE水溶液，于60℃下減壓蒸餾，得到淡黃色透明高黏度液體，檢測(cè)其純度為99.8％。

實(shí)施例2

稱(chēng)取250g大豆粉末磷脂于燒杯中，加入1.25L無(wú)水甲醇，快速攪拌使體系中的粉末磷脂均勻擴(kuò)散，然后加入甲醇鈉10g，于35℃下攪拌19h，抽濾，所得清液pH至8左右。量取100ml甲醇浸泡的D001樹(shù)脂，裝柱，200ml甲醇沖洗柱，以2.0mL/min的流速將上述大豆粉末磷脂的醇解溶液上樣，上樣結(jié)束后，先用1L甲醇洗脫，然后用pH＝5.01的超純水對(duì)柱進(jìn)行解吸。將此解吸液再次上樣至裝有200mL201×7樹(shù)脂的層析柱(400mL水沖洗)中，柱下流出液為GPC水溶液，上樣結(jié)束后用水沖洗至GPC完全流出，檢測(cè)GPC的純度為95.72％，然后采用1％乙酸解吸，所得解吸液即為GPE水溶液，于60℃下減壓蒸餾，得到淡黃色透明高黏度液體，檢測(cè)其純度為98.37％