[發明專利]利用海參腸自溶制備活性物質的方法

在審

• 申請號: 201110435711.8
• 申請日: 2011-12-22
• 公開（公告）號: CN103141872A
• 公開（公告）日: 2013-06-12
• 發明（設計）人: 朱蓓薇;吳海濤;董秀萍;鄭杰;孫黎明;周大勇;李冬梅;楊靜峰
• 申請（專利權）人: 大連工業大學
• 主分類號: A23L1/333
• 分類號: A23L1/333;A23L1/29
• 代理公司: 大連智慧專利事務所 21215
• 代理人: 劉琦

1.一種利用海參腸自溶制備活性物質的方法，其特征在于，以海參腸為原料，經勻漿、自溶、取上清液，冷凍濃縮至原體積的10％～20％或真空冷凍干燥至水分含量小于等于8％，制得海參腸活性物質粗品；再經分離、冷凍干燥制得精制活性物質。

2.根據權利要求1所述利用海參腸自溶制備活性物質的方法，其特征在于，所述自溶的工序為：

勻漿后所得勻漿液經紫外線照射后，加入1～4倍體積、pH?4.0～7.0的檸檬酸與磷酸氫二鈉緩沖溶液，在35～60℃下自溶0.5～4h，或在4～10℃時，自溶4～12h。

3.根據權利要求2所述利用海參腸自溶制備活性物質的方法，其特征在于，所述自溶工序中選用30瓦紫外燈，距離0.5m照射5～40min，進行自溶誘導；

或者，將勻漿液放置在不銹鋼槽內，在上方0.2～0.5m處放置紫外燈，控制漿液液面紫外強度為60～120μW/cm²，保持5～40min進行自溶誘導。

4.根據權利要求3所述利用海參腸自溶制備活性物質的方法，其特征在于，所述取上清液的工序為：2500～6000r/min離心10～30分鐘，取上清液；或者所述取上清液的工序采用超濾的方式，收集10kDa以下的組分。

5.根據權利要求1-4任一所述利用海參腸自溶制備活性物質的方法，其特征在于，所述分離的工序為：

將所述海參腸活性物質粗品上樣于葡聚糖凝膠Sephadex?G-15層析柱，用去離子水洗脫，控制流速為0.3～0.5mL/min，對峰面積占各組分總峰面積70％～80％的活性組分進行收集。

6.根據權利要求5所述利用海參腸自溶制備活性物質的方法，其特征在于，所述冷凍干燥的工序為：在冷阱溫度-30～-45℃、真空度為50～80Pa條件下進行干燥。

7.一種利用海參腸自溶制備活性物質的方法，其特征在于，以海參腸為原料，經勻漿、自溶；

而后取殘渣，加入2～4倍體積的去離子水混勻，90℃～100℃加熱5～15min；冷卻后于50℃、pH7.0下，加入1500～3000U/g蛋白的中性蛋白酶，酶解30～180min；

酶解液于95～100℃加熱5～10min滅酶，冷卻后于2500～6000r/min下離心10～30min；

而后取上清液或采用超濾的方式收集10kDa以下的組分，制得海參腸自溶殘渣活性物質。

8.根據權利要求7所述利用海參腸自溶制備活性物質的方法，其特征在于，所述自溶的工序為：

勻漿后所得勻漿液經紫外線照射后，加入1～4倍體積、pH?4.0～7.0的檸檬酸與磷酸氫二鈉緩沖溶液，在35～60℃下自溶0.5～4h，或在4℃～10℃時，自溶4～12h。

其中，紫外線照射的工序為：所述自溶工序中選用30瓦紫外燈，距離0.5m照射5～40min進行自溶誘導；或者，將勻漿液放置在不銹鋼槽內，漿液厚度1～2cm，在上方0.2～0.5m處放置紫外燈，控制漿液液面紫外強度為60～120μW/cm²，保持5～40min進行自溶誘導。

9.根據權利要求7或8所述利用海參腸自溶制備活性物質的方法，其特征在于，將制得的海參腸自溶殘渣活性物質采用冷凍濃縮的方法濃縮至原體積的10％～20％，或者采用真空冷凍干燥的方式干燥至水分含量小于等于8％，獲得海參腸自溶殘渣活性物質粗品。

10.根據權利要求9所述利用海參腸自溶制備活性物質的方法，其特征在于，將所述海參腸自溶殘渣活性物質粗品上樣于葡聚糖凝膠Sephadex?G-25層析柱，用去離子水洗脫，控制流速為0.2～0.4mL/min，對峰面積占各組分總峰面積的80％～95％的主要組分進行收集；

最后，在冷阱溫度為-30～-45℃，真空度為50～80Pa條件下進行干燥，至水分含量小于等于8％為止，凍干后制得精制活性物質。