[發(fā)明專利]利用海參腸自溶制備活性物質(zhì)的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110435711.8
• 申請日: 2011-12-22
• 公開（公告）號: CN103141872A
• 公開（公告）日: 2013-06-12
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 朱蓓薇;吳海濤;董秀萍;鄭杰;孫黎明;周大勇;李冬梅;楊靜峰
• 申請（專利權(quán)）人: 大連工業(yè)大學
• 主分類號: A23L1/333
• 分類號: A23L1/333;A23L1/29
• 代理公司: 大連智慧專利事務(wù)所 21215
• 代理人: 劉琦

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于海洋副產(chǎn)物精深加工領(lǐng)域，同時涉及自溶、凝膠柱層析和真空冷凍干燥的技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

海參腸是海參加工過程中的副產(chǎn)物，其蛋白質(zhì)含量高，可達70％左右(以干重計)，是制備活性物質(zhì)的良好原料。在中國，海參腸多被作為廢棄物丟棄，利用率極低，造成資源浪費及環(huán)境污染。

海參腸具有較強的自溶能力。目前，有關(guān)利用自溶技術(shù)從海參腸中制備活性物質(zhì)的相關(guān)專利未見報道。關(guān)于海參腸自溶的文獻報道，主要集中在對其內(nèi)源酶進行分離、純化及酶學特性研究。日本學者對日本傳統(tǒng)發(fā)酵食品“鹽辛”的制作方法進行改進，采用靜水壓不添加食鹽而促進海參腸自溶，但未涉及海參腸自溶活性物質(zhì)的提取及分離制備。

發(fā)明內(nèi)容

針對海參加工中的副產(chǎn)物海參腸自溶能力較強，但同時并未得到充分利用的狀況，本發(fā)明旨在提供一種利用自溶技術(shù)制備海參腸活性物質(zhì)及其自溶殘渣活性物質(zhì)的制備方法。

本發(fā)明利用海參腸自溶制備活性物質(zhì)的方法，以海參腸為原料，經(jīng)勻漿、自溶、離心取上清液即為海參腸自溶產(chǎn)物；該產(chǎn)物可進一步采用冷凍濃縮的方法濃縮至原體積的10％～20％；還可以采用真空冷凍干燥的方式干燥至水分含量小于等于8％，從而獲得不同產(chǎn)品形式的海參腸活性物質(zhì)粗品。

其中，所述自溶工序的優(yōu)選方案為：勻漿后所得勻漿液經(jīng)紫外線照射后，加入1～4倍體積、pH4.0～7.0的檸檬酸與磷酸氫二鈉緩沖溶液，進行自溶。根據(jù)實際情況不同自溶可采取兩種條件：溫度在4～10℃時，自溶4～12h，或者溫度在35℃～60℃自溶時，自溶0.5～4h。

優(yōu)選方式下，處理量較少時，紫外線照射可以選用30W紫外燈，距離0.5m照射5～40min后進行自溶誘導；處理量較大時，可以將海參腸勻漿液放置在不銹鋼槽內(nèi)，漿液厚度1～2cm，在上方0.2～0.5m處放置紫外燈，控制漿液液面紫外強度為60～120μW/cm²，保持5～40min進行自溶誘導。

此外，所述離心取上清液的工序，優(yōu)選方式為：2500～6000r/min離心10～30min，取上清液；或采用超濾的方式，收集10kDa以下的組分。

為了獲得海參腸活性物質(zhì)精制品，本發(fā)明在制得海參腸活性物質(zhì)粗品后，經(jīng)分離、冷凍干燥制得精制活性物質(zhì)。

其中，所述分離的工序，優(yōu)選方式為：將所述海參腸活性物質(zhì)粗品上樣于葡聚糖凝膠Sephadex?G-15層析柱，用去離子水洗脫，控制流速為0.3～0.5mL/min，對主要組分(峰面積占各組分總峰面積的70％～80％)進行收集。采用二苯代苦味肼自由基(DPPH)體系和還原能力測定體系，已經(jīng)證明主要組分具有較強的清除DPPH自由基及還原能力。

此外，所述冷凍干燥的優(yōu)選工序為：在冷阱溫度-30～-45℃、真空度為50～80Pa條件下進行干燥。

本發(fā)明另外提供了一種利用海參腸自溶制備活性物質(zhì)的方法，主要針對海參腸自溶殘渣活性物質(zhì)，其目的在于提高海參腸的利用率。具體過程為，以海參腸為原料，經(jīng)勻漿、自溶。而后分離上清液獲得海參腸自溶產(chǎn)物，同時利用余下殘渣作如下處理：加入2～4倍體積的去離子水混勻，90～100℃加熱5～15min。冷卻后于50℃，pH7.0下，加入1500～3000U/g蛋白的中性蛋白酶，如枯草芽孢桿菌1398，酶解30～180min。酶解完畢后，酶解液于95～100℃加熱5～10min滅酶，冷卻后于2500～6000r/min下離心10～30min，取上清液，或采用超濾的方式，收集10kDa以下的組分，即為海參腸自溶殘渣活性物質(zhì)。該產(chǎn)物可進一步采用冷凍濃縮的方法濃縮至原體積的10％～20％；還可以采用真空冷凍干燥的方式干燥至水分含量小于等于8％，從而獲得不同產(chǎn)品形式的海參腸自溶殘渣活性物質(zhì)粗品。

將所述海參腸自溶殘渣活性物質(zhì)粗品上樣于葡聚糖凝膠Sephadex?G-25層析柱，用去離子水洗脫，控制流速為0.2～0.4mL/min，對峰面積占各組分總峰面積的80％～95％的主要組分進行收集。最后，在冷阱溫度為-30～-45℃，真空度為50～80Pa，至水分含量為小于等于8％為止，凍干后制得精制活性物質(zhì)。