[發明專利]一種采用共固定化雙酶水解魚鱗膠原蛋白制備抗氧化活性肽的方法

有效

• 申請號: 201110435489.1
• 申請日: 2011-12-23
• 公開（公告）號: CN102533913A
• 公開（公告）日: 2012-07-04
• 發明（設計）人: 楊安樹;陳紅兵;吳志華;李欣
• 申請（專利權）人: 南昌大學
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06;C12N11/10;C07K1/34
• 代理公司: 南昌新天下專利商標代理有限公司 36115
• 代理人: 施秀瑾

1.一種采用共固定化雙酶水解魚鱗膠原蛋白制備抗氧化活性肽的方法，其特征是按以下步驟：

（1）以木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、中性蛋白酶、Flavourzyme風味蛋白酶、Alcalase堿性蛋白酶中任意兩種酶組成復合蛋白酶，按照活力比為1:1-1:3將兩種酶溶于磷酸鹽緩沖液中配制成質量濃度為1.0-5.0%蛋白酶溶液，取配制的蛋白酶溶液加入pH4-10、質量濃度為2.0-6.0%的海藻酸鈉溶液中，蛋白酶溶液與海藻酸鈉溶液體積比為1:1-1:5；待充分攪拌均勻后，加入質量濃度為0.5-5.0%的氯化鈣溶液中，移入4℃冰箱硬化2-6?h，過濾洗滌；然后加入體積分數為0.1-3%戊二醛溶液中，振蕩0.5?h，于4-25℃靜置交聯4-6?h，用磷酸鹽緩沖液將殘余戊二醛和未固定化的酶洗去，用冷風吹干表面水分得共固定化雙酶；

（2）將新鮮魚鱗浸泡洗凈、烘干、粉碎、篩網、脫鈣，脫除魚銀、色素物質和可溶性雜蛋白；

（3）控制溫度為40-60℃，pH在6-10，按魚鱗重量比1-5%加入固定化雙酶酶解，酶解時間為2-6?h，期間不斷攪拌并加入酸液或堿液使反應體系維持在初始值pH值，酶水解反應結束后升溫至100℃，保持10?min滅活，快速冷卻反應液，然后采用離心機轉速5000?r/min，離心分離15-20?min，得到上層的酶解液；

（4）在酶解液中加入質量比為0.5-3%食品級粉狀活性炭，將水解液置于50℃的水浴鍋內處理60?min，然后經5000?r/min離心獲得上清液，即魚鱗蛋白酶解液；

（5）魚鱗蛋白酶解液經10?kDa超濾膜截流分離，保留濃縮液；將濾液再經3kDa超濾膜截流分離，保留濃縮液和濾液；超濾過程中組件最大工作壓力不超過0.15?MPa，依次得到分子量為10?kDa以上、3-10?kDa、3?kDa以下的魚鱗多肽溶液；

（6）真空濃縮；

（7）冷凍干燥。