[發明專利]一種高含量羥脯氨酸的鹿膠原肽的制備方法

無效

• 申請號: 201110433953.3
• 申請日: 2011-12-21
• 公開（公告）號: CN103173510A
• 公開（公告）日: 2013-06-26
• 發明（設計）人: 鄒漢法;靳艷;劉曉艷
• 申請（專利權）人: 中國科學院大連化學物理研究所
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標代理有限公司 21002
• 代理人: 馬馳

技術領域

本發明涉及鹿膠原肽的制備方法，本發明制備所得膠原蛋白得率高、羥脯氨酸的含量高、分子量小，可應用于食品、化妝品、保健品、藥品等領域。

背景技術

膠原蛋白是地球上最豐富的蛋白質，存在于皮膚、骨頭、軟骨、肌腱等組織中，起著支撐、保護、連結等作用，脊椎生物中膠原蛋白的含量可達25-30％。膠原蛋白是由三條螺旋結構的肽鏈組成，分子量30萬道爾頓，不溶于水。膠原蛋白的三螺旋結構中有高度重復的Gly-X-Y(甘氨酸-X-Y，XY是不同的氨基酸)序列，特異性存在Gly-Pro-Hpy(甘氨酸-脯氨酸-羥脯氨酸)序列。膠原蛋白經水解后使原本包含在蛋白質中的肽段釋放出來而表現促進骨細胞分化、血管緊張素轉化酶抑制、抗氧化等生物活性，因此膠原蛋白水解所得的膠原肽廣泛應用于保健食品、化妝品等領域。膠原肽分子量小、在水中溶解性好，可穿過腸障礙進入血液系統，從而達到皮膚組織，臨床前及臨床研究已經證明膠原蛋白水解物可改善皮膚狀況(ITE?Lett.2006，7，386-390)。羥脯氨酸是膠原蛋白的特征氨基酸，在其他蛋白質中很少見。文獻證明膠原肽中主要成分Pro-Hyp可促進皮膚纖維細胞生長(Agric.Food?Chem.2009，57，444-449)和改善關節炎癥狀(Osteoarthri?tis?and?Cartilage，17(12)，1620-1627)，食用膠原肽中的Pro-Hyp對身體具有積極的作用(Food?Chemistry?129(2011)1019-1024)。因此膠原肽制備過程中最大限度地提取、保留羥脯氨酸對膠原肽的活性具有至關重要。

膠原蛋白中羥脯氨酸的含量主要與原料來源相關，但是同一來源的膠原肽中羥脯氨酸的含量主要取決于制備方法(吉林大學學報自然科學學報，2001，106-108)。膠原肽的提取方法有：酸法、堿法和酶法，酸法和堿法會破壞膠原肽中氨基酸而很少應用，酶法是目前研究和應用較多的方法。酶法分為一步法和兩步法，一步法所采用的酶可以是單酶也可以是復合酶，二步法是不同單酶分次酶解。目前文獻報道的各種來源的膠原肽中羥脯氨酸的含量均不超過12％，文獻報道的鹿皮膠原肽中羥脯氨酸的含量僅為8.6％(吉林大學學報自然科學學報，2001，106-108)，鹿茸膠原蛋白水解物中羥脯氨酸僅為6.7％(李銀清，長春中醫藥大學博士論文，2010)。本發明提供一種簡單易行的單酶、復合酶相結合的二步法鹿膠原肽制備方法，可顯著提高膠原蛋白提取率和羥脯氨酸含量。

發明內容

本發明的目的是提供一種高含量羥脯氨酸鹿膠原肽的制備方法，其以鹿皮、鹿筋為原料，所制備的膠原肽羥脯氨酸大于16％，分子量小于3000道爾頓，在醫藥領域和功能性食品領域具有良好的應用前景

為實現上述目的，本發明采用的技術方案如下：

以新鮮的鹿皮、鹿筋等為原料，鹿皮或鹿筋用純水清洗干凈，剪為2～3平方厘米的碎片，鹿皮或鹿筋碎片按照1∶1～100質量比加入0.01M醋酸緩沖液，再按1∶10～500加入胃蛋白酶，于20～50℃攪拌反應1～10小時。將上述反應液的pH用1M?NaOH調至6～8，加入復合酶進行酶解，加酶量為反應物質量的0.1～1％，于20～70℃攪拌反應1～10小時，反應結束后90℃滅活20min。將上述反應液5000rpm離心5min，收集上清，冷凍干燥得到鹿膠原肽。

酶解過程為兩步法，第一步用單酶酶解，第二步用復合酶酶解。單酶酶解所用酶為胃蛋白酶、胰蛋白酶、中性蛋白酶其中一種，復合酶為胰蛋白酶、風味蛋白酶、木瓜蛋白酶、堿性蛋白酶或中性蛋白酶其中兩種、三種、四種或五種酶組合使用。

按照所述的制備方法制備的膠原肽具有以下特征：膠原肽得率＞90％，羥脯氨酸的含量＞16％，分子量＜3000道爾頓。

本發明所制備的鹿膠原肽應用時，以常規的制劑工藝，單獨使用或與其他藥物配合制備成不同的劑型，如散劑、丸劑、膠囊劑、片劑、栓劑、膏劑、酊劑、沖劑、口服液等；還可用于化妝品添加劑等。

本發明的特點如下：

1.本發明制備工藝的特點是單酶-復合酶兩步法，首先用單一酶切斷膠原蛋白三螺旋結構中肽的空間區域，使膠原蛋白與其他蛋白分離出來；再用復合酶切斷每條肽鏈內的連接使分子量減小，同時使羥脯氨酸充分暴露。單酶-復合酶兩步法保護了膠原蛋白中原有的羥脯氨酸不被破壞，又使肽鏈中羥脯氨酸暴露，因此得到高羥脯氨酸的膠原肽。