[發明專利]一種鴨病毒性肝炎自殺性DNA疫苗及其構建方法和應用

無效

• 申請號: 201110433787.7
• 申請日: 2011-12-21
• 公開（公告）號: CN102580116A
• 公開（公告）日: 2012-07-18
• 發明（設計）人: 劉光清
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院上海獸醫研究所
• 主分類號: A61K48/00
• 分類號: A61K48/00;A61K39/29;A61P31/14;C12N15/51;C12N15/86
• 代理公司: 上海漢聲知識產權代理有限公司 31236
• 代理人: 胡晶

1.一種鴨病毒性肝炎自殺性DNA疫苗，其特征在于，該疫苗由DHV-VP1基因和甲病毒復制子載體pSCA1組成，所述DHV-VP1基因是DHV病毒的致病決定基因，其為DHV病毒基因中第2106至2819的核苷酸，具有如下所示的核苷酸序列：

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2.一種如權利要求1所述的鴨病毒性肝炎自殺性DNA疫苗的構建方法，其特征在于，包括如下步驟：

1)DHV病毒總RNA的提取及純化：將DHV?ZJ08病毒株腿部肌注射兩日齡的小鴨，待小鴨死亡后，取其肝臟制備研磨液，按常規方法提取DHV病毒總RNA；

2)設計特異性引物：根據DHV病毒VP1蛋白基因序列分析設計出一對特異性引物，在上游引物中引入Kozak序列：

VP1-F：5’-CGGGATCC?BamH?IGCCACCATG_kozak序列GGTGATTCCAACCAGTT-3’，

VP1-R：5’-TCCCCCGGG?_Sma?ITTCAATTTCCAGATTGAGTTCAGA-3’；

3)通過反轉錄-聚合酶鏈式擴增方法，克隆得到DHV-VP1的全長cDNA基因序列；

4)將步驟3)擴增的VP1片段，利用AxyPrep?DNA凝膠回收試劑盒純化回收VP1?cDNA片段；

5)將VP1全長cDNA片段重組到甲病毒復制子載體pSCA1真核表達載體中，構建成鴨病毒性肝炎自殺性DNA疫苗——抗DHV的pSCA1-VP1?DHV疫苗。

3.如權利要求2所述的鴨病毒性肝炎自殺性DNA疫苗的構建方法，其特征在于，步驟3)進一步包括：

在聚合酶鏈式反應中，反應程序為：95℃預變性5min，然后94℃變性1min，54℃退火1min，72℃延伸1min，35個循環，72℃延伸10min后，10℃終止反應，于1％瓊脂糖凝膠電泳膠回收聚合酶鏈式反應產物。

4.一種如權利要求1所述的鴨病毒性肝炎自殺性DNA疫苗在制備預防鴨病毒性肝炎藥物中的應用。

5.一種如權利要求1所述的鴨病毒性肝炎自殺性DNA疫苗在制備治療鴨病毒性肝炎藥物中的應用。