[發明專利]含抗除草劑基因玉米葉綠體轉基因表達載體及其應用

無效

• 申請號: 201110433149.5
• 申請日: 2011-12-21
• 公開（公告）號: CN102533844A
• 公開（公告）日: 2012-07-04
• 發明（設計）人: 李軼女;張志芳;王金輝;王國增;程奇;倪丕沖;沈桂芳
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院生物技術研究所
• 主分類號: C12N15/82
• 分類號: C12N15/82;C12N5/10;C12N15/66;A01H5/00
• 代理公司: 北京市德權律師事務所 11302
• 代理人: 余光軍

1.一種含抗除草劑基因玉米葉綠體轉基因表達載體，其特征在于，包括：?5-烯醇式丙酮莽草酸-3-磷酸合酶編碼基因的表達盒，玉米葉綠體基因組中的同源重組片段atpB以及rbcL；其中，5-烯醇式丙酮莽草酸-3-磷酸合酶編碼基因的表達盒位于同源重組片段atpB和rbcL之間。

2.按照權利要求1所述的含抗除草劑基因玉米葉綠體轉基因表達載體，其特征在于：所述的5-烯醇式丙酮莽草酸-3-磷酸合酶編碼基因的表達盒由玉米葉綠體啟動子、5-烯醇式丙酮莽草酸-3-磷酸合酶編碼基因和終止子組成。

3.按照權利要求2所述的含抗除草劑基因玉米葉綠體轉基因表達載體，其特征在于：所述的玉米葉綠體啟動子包括prrn、atpA、atpB、psbA、psbD或rbcL啟動子；所述的終止子為psbA終止子。

4.按照權利要求3所述的含抗除草劑基因玉米葉綠體轉基因表達載體，其特征在于：所述的prrn啟動子的核苷酸序列為SEQ?ID?No.1所示；所述psbA終止子的核苷酸序列為SEQID?NO:2?所示。

5.按照權利要求1所述的含抗除草劑基因玉米葉綠體轉基因表達載體，其特征在于：所述的同源重組片段atpB的核苷酸序列為SEQ?ID?No.3所示；所述的同源重組片段rbcL的核苷酸序列為SEQ?ID?No.4所示。

6.按照權利要求1所述的含抗除草劑基因玉米葉綠體轉基因表達載體，其特征在于：還含有顯性選擇標記基因的表達盒；所述的顯性選擇標記基因優選為細菌來源的抗菌素抗性基因；更優選為抗潮霉素基因，其核苷酸序列為SEQ?ID?No.5所示。

7.含有權利要求1-6任何一項所述的含抗除草劑基因玉米葉綠體轉基因表達載體的玉米組織、玉米細胞或玉米原生質體。

8.一種構建權利要求1-6任何一項所述含抗除草劑基因玉米葉綠體轉基因表達載體的方法，該方法包括以下步驟：

（1）、將5-烯醇式丙酮莽草酸-3-磷酸合酶編碼基因可操作的與玉米葉綠體特異啟動子和終止子相連接，使5-烯醇式丙酮莽草酸-3-磷酸合酶編碼基因置于玉米葉綠體特異啟動子和終止子的調控之下，得到5-烯醇式丙酮莽草酸-3-磷酸合酶編碼基因的表達盒；

（2）、將玉米葉綠體基因組中的同源重組片段atpB以及rbcL分別連接在5-烯醇式丙酮莽草酸-3-磷酸合酶編碼基因的表達盒的兩側，即得。

9.權利要求1所述含抗除草劑基因玉米葉綠體轉基因表達載體在提高玉米草甘膦抗性中的應用。

10.按照權利要求8所述的應用，其特征在于，包括：將所述的含抗除草劑基因玉米葉綠體轉基因表達載體轉化玉米愈傷組織、玉米細胞或玉米原生質體，篩選得到玉米抗性愈傷組織或細胞；(3)誘導玉米抗性愈傷組織或細胞分化，再生獲得玉米抗除草劑植株。