[發明專利]一種胎膜早破檢測試劑盒及制備方法

無效

• 申請號: 201110430619.2
• 申請日: 2011-12-20
• 公開（公告）號: CN103175968A
• 公開（公告）日: 2013-06-26
• 發明（設計）人: 張超;陳奉玲;洪蓮
• 申請（專利權）人: 安徽深藍醫療科技有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及檢測試劑盒領域，更具體地說涉及一種胎膜早破檢測試劑盒及制備方法。

背景技術

臨產前的胎膜破裂稱為胎膜早破(premature?rupture?of?fetal?membrane，prom)，是產科的一種常見并發癥，其發病率國內報道約為10％。prom并發宮腔感染可導致早產、圍生兒死亡，是母兒患病和死亡的重要原因之一。

現有技術中，采用金標準是診斷胎膜早破的一種準確方法，即在孕婦羊膜腔內注入染料(如美藍)，若陰道內有被感染著色的液體流出即可診斷為胎膜早破，但采用金標準檢測臨床很難操作，并且造成患者的痛苦，故臨床很少使用。臨床上通常采用詢問病史、患者自訴陰道有羊水流出、陰道分泌物pH值變味偏堿性(正常陰道分泌物pH為4.5～5.5)、顯微鏡下查見陰道分泌物涂片中出現羊水結晶等方法，這些方法雖然操作簡單，但準確性、敏感性均較低。

膠體金免疫層析分析是應用膠體金標記技術，以膠體金作為示蹤物，應用于抗原抗體反應的一種新型免疫標記技術。層析過程中，金標記物于事先固相化于層析材料：如硝酸纖維素膜即NC膜上的抗原或抗體發生特異性的免疫反應而被截留，進一步富集，形成肉眼可見紫紅色條帶，從而得到直觀的實驗結果，達到檢測的目的。國際專利PCT/US2003/025125公開了一種采用雙抗夾心膠體金免疫層析法檢測陰道分泌物中羊水的裝置和方法，其使用的兩種單克隆抗體是針對a1-微球蛋白(PAMG-1)的不同抗原表位的。中國專利申請200620083734.1公開了一種一次性胎膜早破pH試紙診斷棒，但其敏感度不高，易引起假陰性。國際專利WO2007030890公開了一種利用ELISA方法檢測羊水的方法，該法耗時長，需要操作儀器，對操作人員要求較高。因此亟需一種靈敏度高又便于操作、快捷的新型胎膜早破檢測試劑盒。

本發明的發明人通過研究發現，非磷酸化胰島素樣生長因子結合蛋白1(IGFBP-1)是妊娠3個月后直到分娩前羊水中最主要的蛋白質之一，當發生胎膜破裂時，羊水中的IGFBP-1可通過胎膜破口漏出到宮頸陰道中。且IGFBP-1在羊水中的體積分數比母親血液中高100～1000倍，宮頸黏液、精液和尿液對實驗均無影響，檢測IGFBP-1診斷prom與孕齡大小無關，對足月及未足月妊娠孕婦具有同樣的診斷價值，從而完成了本發明。

發明內容

本發明的目的在于提供一種特異性好、靈敏度高、檢測快速且對患者無痛苦的胎膜早破檢測試劑盒，可用于家庭自測及床邊檢驗。

本發明的另一目的在于提供這種胎膜早破檢測試劑盒的制備方法。

為了實現上述目的，本發明采用如下的技術方案：

一種胎膜早破檢測試劑盒，它包括胎膜早破檢測試紙、緩沖液和棉拭子，所述檢測試紙包括檢測區(T)、質控區(C)及膠體金，其特征在于所述檢測區(T)包被有抗人胰島素樣生長因子結合蛋白-1單克隆抗體1，所述質控區(C)包被有抗鼠多克隆抗體，所述膠體金包被有抗人胰島素樣生長因子結合蛋白-1單克隆抗體2。

在一個優選的實施方案中，所述檢測試紙為試紙條。此時，胎膜早破檢測試劑盒包括胎膜早破檢測試紙條、緩沖液和棉拭子。其中，所述胎膜早破檢測試紙條由下往上依次由浸入區、膠體金、檢測區、質控區和手持區組成。

在一個優選的實施方案中，所述檢測試紙為試紙卡。此時，胎膜早破檢測試劑盒還包括有滴管，即胎膜早破檢測試劑盒包括胎膜早破檢測試紙卡、緩沖液、棉拭子和滴管。其中，所述胎膜早破檢測試紙卡還包括加樣孔，即所述胎膜早破檢測試紙卡由下往上依次由加樣孔、膠體金、檢測區、質控區和手持區組成。

一種胎膜早破檢測試劑盒的制備方法，其特征在于工藝步驟如下：

(1)處理液的配置步驟：按濃度比例配置金標墊處理液、樣品墊處理液、點膜抗體稀釋液、標記抗體稀釋液和膠體金復合物稀釋液；

(2)試劑盒的制備步驟：通過膜材的處理、點膜、膠體金復合物的制備、噴金、膜材的切割、組裝、大板的切割和包裝步驟得到鋁箔袋封裝完整的試劑盒。

在點膜配液時，取羊抗鼠多克隆抗體，用PBS稀釋成0.5mg/ml的抗體溶液。取胰島素樣生長因子結合蛋白-1單克隆抗體1，用PBS稀釋成1.0mg/ml的抗體溶液。

在膠體金復合物的制備過程中，所述膠體金復合物中每1ml膠體金加入5～20μlK₂CO₃，選擇能夠保持顏色不變的最低的pH值，一般選擇1ml膠體金加入15μl1K₂CO₃