[發(fā)明專利]一種黑果枸杞多糖的分離純化方法及分離得到的五種多糖

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110428206.0
• 申請日: 2011-12-19
• 公開（公告）號: CN103159864A
• 公開（公告）日: 2013-06-19
• 發(fā)明（設計）人: 杜昱光;彭強;許青松;李曙光;王仲孚;王文霞
• 申請（專利權）人: 中國科學院大連化學物理研究所
• 主分類號: C08B37/00
• 分類號: C08B37/00
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標代理有限公司 21002
• 代理人: 馬馳

技術領域

本發(fā)明涉及一種以黑果枸杞為原料提取純化黑果枸杞多糖的方法及分離得到的五種多糖

背景技術

黑果枸杞(Lycium?ruthenicum?Murr)系茄科(Solanaceae)枸杞屬(Lycium?L.)。多年生灌木，具棘刺，漿果球形，成熟后為紫黑色，有很高的光合效率和較強抗逆性，是我國西北荒漠地區(qū)一種特有的、亟待開發(fā)的野生植物，分布于山西北部、寧夏、甘肅、青海、新疆、西藏等省。黑果枸杞果實味甜多汁，含豐富的維生素、有機酸及糖類，民間常生食或榨汁做飲料；黑果枸杞也具有一定的醫(yī)療保健功能，藏醫(yī)用于治療心熱病、心臟病、月經(jīng)不調、停經(jīng)等病癥。多糖廣泛存在于中藥材中，現(xiàn)代藥理學研究證明，多糖是中草藥發(fā)揮獨特療效的重要物質基礎。黑果枸杞多糖作為黑果枸杞的一個重要組成成分，研究表明其有降血糖和抗疲勞功效。因此提取其多糖并將其成分制成各種中成藥的前景十分廣闊。

目前關于黑果枸杞多糖提取工藝的研究比較粗淺，僅限于通過傳統(tǒng)方法提取粗多糖，從黑果枸杞中提取的粗多糖含有大量的大分子蛋白質、色素、無機鹽及其他小分子等雜質，產(chǎn)品純度低，系屬多種糖組分和蛋白色素的混合物，目前還未制備出黑果枸杞多糖純品，對黑果枸杞多糖的結構研究也幾乎空白。為了進一步開發(fā)黑果枸杞這一寶貴資源，發(fā)掘新藥源，本發(fā)明以野生黑果枸杞為原料，采用超聲加熱法得到粗多糖，對提取的粗多糖進行脫蛋白及脫色工藝研究，然后利用離子交換層析和凝膠過濾層析方法純化黑果枸杞多糖，首次制備出五種黑果枸杞多糖純品，并且對五種組分多糖的理化性質、分子量、單糖組成等進行了系統(tǒng)的分析鑒定，為將來在食品、化妝品、保健品、醫(yī)藥等領域應用奠定了堅實的基礎。

發(fā)明內容

本發(fā)明的目的在于針對現(xiàn)有技術提取的黑果枸多糖純度低、多糖結構不明確，提供一種可盡快實現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)，轉化為應用的黑果枸杞多糖的提取純化工藝，并對制備出的多糖進行結構鑒定。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術方案為：

本發(fā)明涉及一種從黑果枸杞果實分離純化多糖的方法及結構鑒定，包括以下步驟：

(1)原料粉碎：黑果枸杞果實加2～8倍體積的水用組織搗碎機打碎至均勻狀態(tài)。

(2)超聲提取：將黑果枸杞勻漿后放入超聲提取設備，溫度50～80℃，超聲波頻率20～60KHz，提取時間1～4h，功率50W，將提取液過濾，殘渣用2～8倍體積水再次加熱超聲提取1～4h，合并兩次提取液。

(3)醇沉：提取液40℃真空濃縮后，加乙醇調濃度至75～85％，靜置12h后過濾得多糖沉淀。

(4)脫蛋白：將多糖沉淀加水溶解后，加三氯乙酸至濃度2～6％，攪拌15～60min后離心，保留上清糖液。

(5)脫色：將脫蛋白后的多糖液用氨水調pH值至8～9，30～60℃、時間15～60min、H₂O₂用量為2％～10％。

(6)超濾：將多糖液經(jīng)過1～3萬分子量的膜，冷凍干燥得黑果枸杞粗多糖(LRP)。

(7)離子交換柱層析：DEAE-纖維素用0.01～0.10mol/L?NaHCO₃溶液平衡為HCO₃^-型，依次用蒸餾水、0.02～0.07、0.09～0.15、0.20～0.30、0.40～0.60mol/L?NaHCO₃溶液梯度洗脫，分別后獲得五種多糖粗品LRP1、LRP2、LRP3、LRP4和LRP5。

(8)凝膠過濾柱層析：Sephadex?G-100凝膠色譜柱以0.05～0.20mol/L?NaCl水溶液洗脫，使用Sephadex?G-25柱蒸餾水水洗脫鹽，濃縮冷凍干燥后獲得五種多糖純品命名為LRGP1、LRGP2、LRGP3、LRGP4和LRGP5。

(9)多糖理化性質測定：多糖純度及分子量測定采用HPGPC法，糖含量測定采用苯酚硫酸法，蛋白含量測定采用考馬斯亮藍法，單糖組分采用糖醇乙酸酯氣相色譜法，五種多糖組分理化性質如下：

表黑果枸杞多糖的理化性質

(Rha：鼠李糖；Ara：阿拉伯糖；Xyl：木糖；Man：甘露糖；Glc：葡萄糖；Gal：半乳糖；GalA：半乳糖醛酸)