[發明專利]具有眼睛保健效果的鮮食型玉米的選育方法

有效

• 申請號: 201110427526.4
• 申請日: 2011-12-20
• 公開（公告）號: CN102778436A
• 公開（公告）日: 2012-11-14
• 發明（設計）人: 袁名安;吳殿星;劉新華;劉莉;舒小麗;曹春信;徐秀紅
• 申請（專利權）人: 金華市農業科學研究院
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31;G01N21/33;G01N30/02;A01H1/02
• 代理公司: 金華科源專利事務所有限公司 33103
• 代理人: 胡杰平

1.一種具有眼睛保健效果的鮮食型玉米的選育方法，包括以下步驟：

1）收集并種植籽粒外觀為黃色或淺黃色的玉米，在適宜鮮食時期剝下完整籽粒并用小刀沿籽粒中縫縱切，選取胚乳全部為黃色或淺黃色的胚乳；然后提取皂化物備用；

2）采用紫外可見分光光度法，檢測步驟1）所篩選的新鮮籽粒中的總類胡蘿卜素含量；該方法采用檢測波長為454nm；保留總類胡蘿卜素含量10mg/kg以上的籽粒；

3）種植步驟2）篩選的籽粒，采用高效液相色譜法（HPLC法）對其新鮮玉米籽粒中玉米黃質含量進行定量分析；保留玉米黃質含量8mg/kg以上的材料。

2.根據權利要求1所述的具有眼睛保健效果的鮮食型玉米的選育方法，其特征在于，還包括了步驟4），繼續種植擴繁步驟3）所選籽粒，篩選農藝性狀好、配合力強的玉米品系，或以帶有富含玉米黃質基因的玉米籽粒為供體，經雜交、回交或體細胞無性系變異獲得的品系進行配組，篩選綜合表現良好的品系，最終獲得遺傳穩定的富含玉米黃質的玉米自交系或雜交種。

3.根據權利要求1所述的具有眼睛保健效果的鮮食型玉米的選育方法，其特征在于，所述步驟1）中的玉米籽粒是玉米常規品種或雜交種親本或種植資源或誘變產生的品系或自交系。

4.根據權利要求1所述的具有眼睛保健效果的鮮食型玉米的選育方法，其特征在于，所述步驟1）中的皂化物制取步驟如下：

a、取20g玉米籽粒磨碎，加丙酮提取液，抽濾，反復幾次，直到提取液無色；

b、合并提取液，減壓濃縮至干；濃縮時溫度低于40度；

c、用少量甲醇溶解干燥的丙酮粗提物，然后加入等體積的30%（體積比）甲醇-KOH皂化4小時以上，得到皂化液；

d、減壓濃縮皂化液到最小體積，加少量乙酸乙酯和正己烷等體積比配置的混合液（1：1=V/V）萃取，重復萃取多次，直到萃取液無色；?

e、?合并萃取液，在分液漏斗中用蒸餾水洗去皂化時的堿液，取上層萃取液減壓濃縮至最小體積，得到類胡蘿卜素提取物；

f、將濃縮好的類胡蘿卜素提取物轉移到1.5ml的離心管中，用N2氣吹干剩余的溶劑，-20℃保存備用；

g、每樣重復三次。

5.根據權利要求1所述的具有眼睛保健效果的鮮食型玉米的選育方法，其特征在于，所述紫外可見分光光度法具體為：稱取0.1-0.2g皂化物，磨碎，加入5ml?正已烷:丙酮=3:2?(體積比)，暗條件下浸提16小時，中間搖動幾次；然后加入1ml?20%（體積比）?KOH-甲醇，暗條件下反應一個小時；再加入3ml正已烷和1ml?10wt%硫酸鈉溶液，混勻后讓其靜止分層，上層黃色液體即為粗提的總類胡蘿卜素溶液；以空白為對照，在紫外-可見分光光度計454nm處測定。

6.根據權利要求1所述的具有眼睛保健效果的鮮食型玉米的選育方法，其特征在于，所述高效液相檢測法具體為：檢測采用Waters的高效液相檢測系統，其中檢測器為2998型二極管陣列檢測器，色譜柱為Spherisorb?ODS2（5μm，250×4.6mm），流動相為乙腈：甲醇：二氯甲烷：正己烷=85：5：5：5（體積比），流速1ml/min；樣品用1ml流動相溶解，過0.45μm的濾膜后進樣，進樣量10μl。