[發明專利]一種雞IL-18與新城疫病毒HN基因重組融合蛋白及應用

無效

• 申請號: 201110426952.6
• 申請日: 2011-12-17
• 公開（公告）號: CN102676471A
• 公開（公告）日: 2012-09-19
• 發明（設計）人: 張春杰;劉一塵;李靜;程相朝;吳庭才;李銀聚;王臣;張明亮
• 申請（專利權）人: 河南科技大學
• 主分類號: C12N9/24
• 分類號: C12N9/24;C12N15/62;C12N15/81;C12N1/19;A61K39/17;A61K39/39;A61P31/14;C12R1/84
• 代理公司: 鄭州睿信知識產權代理有限公司 41119
• 代理人: 牛愛周

1.一種chIL-18-HN融合蛋白，其特征在于：主要由雞白細胞介素18(chIL-18)的氨基酸序列，新城疫病毒血凝素-神經氨酸酶(HN蛋白)的氨基酸序列，以及位于chIL-18氨基酸序列和新城疫病毒HN蛋白的氨基酸序列之間的柔性Linker肽氨基酸序列組成；由雞白細胞介素18(chIL-18)基因和雞新城疫病毒HN基因通過柔性Linker肽串聯連接而成。

2.根據權利要求1所述的chIL-18-HN融合蛋白，其特征在于：該蛋白具有SEQ?ID?NO.7所示的氨基酸序列。

3.根據權利要求1所述的chIL-18-HN融合蛋白，其特征在于：所述的柔性Linker肽具有SEQ?ID?NO.6所示的氨基酸序列。

4.一種分離的DNA序列，其特征在于：編碼具有序列為SEQ?ID?NO.7的氨基酸序列的融合蛋白。

5.根據權利要求4所述的DNA序列，其特征在于：具有SEQ?ID?NO.5的核苷酸序列。

6.一種重組畢赤酵母載體，其特征在于：它含有SEQ?ID?NO.5的DNA序列。

7.一種重組畢赤酵母菌，其特征在于：它含有SEQ?ID?NO.5的DNA序列。

8.一種重組融合蛋白的制備方法，其特征在于：包括以下步驟：

(1)獲得編碼chIL-18-HN融合蛋白的基因序列；

(2)將步驟(1)獲得的chIL-18-HN融合蛋白的基因序列，插入到畢赤酵母載體pPICZαA中，得到重組表達的畢赤酵母載體，命名為pPICZαA-chIL-18-HN；

(3)將步驟(2)獲得的重組表達的畢赤酵母載體pPICZαA-chIL-18-HN，電擊轉化入畢赤酵母菌X-33感受態細胞中，高抗性篩選和PCR鑒定，獲得表達重組融合蛋白的基因畢赤酵母X-33菌株；

(4)將步驟(3)獲得的表達重組融合蛋白的基因工程酵母X-33菌株，培養，分離培養液上清，獲得重組融合蛋白。

9.根據權利要求8所述的重組融合蛋白的制備方法，其特征在于：步驟(4)中的培養條件為：在pH6.0的BMMY培養液中30℃、250r/min下振蕩培養，甲醇誘導濃度1.5％、誘導時間120h，期間每24h補加終濃度為1.5％的甲醇。

10.一種如權利要求8所獲得的重組融合蛋白在制備雞新城疫預防和治療藥物中的應用。