[發明專利]一種氣液接觸式卷煙全煙氣暴露下的細胞毒性檢測方法有效
| 申請號： | 201110423501.7 | 申請日： | 2011-12-16 |
| 公開（公告）號： | CN102495183A | 公開（公告）日： | 2012-06-13 |
| 發明（設計）人： | 米其利;夭建華;管瑩;李雪梅;周嵐;繆明明 | 申請（專利權）人： | 云南煙草科學研究院 |
| 主分類號： | G01N33/00 | 分類號： | G01N33/00 |
| 代理公司： | 昆明今威專利商標代理有限公司 53115 | 代理人： | 楊宏珍 |
| 地址： | 650106 云南省昆*** | 國省代碼： | 云南;53 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 接觸 卷煙 煙氣 暴露 細胞 毒性 檢測 方法 | ||
1.一種氣液接觸式卷煙全煙氣暴露下的細胞毒性檢測方法，其特征在于該方法的步驟如下：
a.按常規方法傳代培養CHO細胞，并制備CHO細胞懸浮液，細胞濃度是(5-10)×104個/mL，并將之分裝至專利號為ZL201120063251.6的全煙氣暴露瓶內，10mL/瓶；
b.將全煙氣暴露瓶置于37℃恒溫水浴鍋內，并和潔凈空氣瓶及直線型吸煙機連接；
c.在吸煙機控制面板上按照國標GB/T?16450設定卷煙抽吸參數；
d.按c步驟設定的卷煙參數進行卷煙的抽吸，再經流速為0-1000mL/min的潔凈空氣稀釋的卷煙全煙氣的暴露，暴露時間均是5min；暴露完畢，取下全煙氣暴露瓶，進行中性紅細胞毒性試驗或MTT細胞毒性試驗；
e.細胞毒性檢測：
(1)中性紅細胞毒性試驗
將暴露完畢的細胞懸浮液轉移至離心管內，1000rpm/min轉速下離心5-10min；移除上清液，加入新鮮的常規生長培養基10mL，制成細胞懸浮液，并將之接種至96孔細胞培養板內，置于CO2培養箱內培養24h，后按常規方法進行中性紅細胞毒性試驗；
(2)MTT細胞毒性試驗
按步驟e.(1)的操作將CHO細胞懸浮液種植96孔細胞培養板，置于CO2培養箱內培養24h，后按常規方法進行MTT細胞毒性試驗；
f.結果分析
該暴露方式下，煙氣暴露量和細胞毒性的劑量反應關系按以下步驟分析：
(1)全煙氣的稀釋倍數＝(煙氣流速+潔凈空氣流速)/煙氣流速；
(2)在直線型吸煙機上分析單支受試卷煙的煙氣總粒相物TPM量和抽吸口數，則每口的TPM量＝單支卷煙的TPM量/單支卷煙的抽吸口數；暴露時間5min時的抽吸口數是6口，則10mL的細胞懸浮液暴露5min時的煙氣暴露量＝單支卷煙的TPM量/單支卷煙的抽吸口數×6口/10mL；
(3)根據上述公式分析煙氣暴露量和細胞毒性間的劑量反應關系，細胞毒性的大小用細胞抑制率CI表示。
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