[發明專利]針對亞細亞鐮刀菌的分子檢測方法及其應用

有效

• 申請號: 201110422147.6
• 申請日: 2011-12-15
• 公開（公告）號: CN102559873A
• 公開（公告）日: 2012-07-11
• 發明（設計）人: 張旭;周永進;馬鴻翔;余桂紅;孫曉波;王磊;邢錦城
• 申請（專利權）人: 江蘇省農業科學院
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/04
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司 32200
• 代理人: 孫忠浩

1.一種針對亞細亞鐮刀菌的分子檢測方法，是利用對亞細亞鐮刀菌的一對特異性引物對樣本提取的DNA進行PCR擴增，再對擴增產物進行電泳凝膠成像分析，其特征在于：一對特異性引物為：上游引物SEQ?ID?NO.1和下游引物SEQ?ID?NO.2；對PCR擴增產物進行電泳凝膠成像分析中，根據172bp處是否出現特異條帶來判斷樣本是否與亞細亞鐮刀菌相關；

所述的一對特異性引物是基于亞細亞鐮刀菌相關序列擴增多態性SRAP標記，SRAP標記的序列為SEQ?ID?NO.3，其大小為172bp。

2.根據權利要求1所述的針對亞細亞鐮刀菌的分子檢測方法，其特征在于：DNA是通過改良CTAB法或改良SDS法從樣本中提取的。

3.根據權利要求1所述的針對亞細亞鐮刀菌的分子檢測方法，其特征在于：所述樣本提取的DNA是指從農作物籽粒或飼料樣本中提取的農作物或飼料DNA。

4.根據權利要求3所述的針對亞細亞鐮刀菌的分子檢測方法，其特征在于：所述的農作物是指麥類農作物。

5.根據權利要求1所述的針對亞細亞鐮刀菌的分子檢測方法，其特征在于：所述樣本提取的DNA是指：病原菌基因組樣本提取的DNA。

6.根據權利要求1～5之一所述的針對亞細亞鐮刀菌的分子檢測方法，其特征在于：PCR擴增，反應體系20μL，包括DNA?10-20ng，2μL?10×buffer，1.6μL2.5mmol/L?dNTP，1.2μL?25mmol/L?MgCl₂，2.5μmol/L上游及下游引物各2μL，1.0U?Taq酶，ddH₂O補齊至20μL；PCR擴增條件為第一循環95℃預變性5min；然后95℃變性45sec，60℃退火30sec，72℃延伸45sec，共35個循環；最后一個循環為72℃延伸10min，擴增產物4℃保存。

7.根據權利要求6所述的針對亞細亞鐮刀菌的分子檢測方法，其特征在于：所述的電泳是指：在2％瓊脂糖凝膠中用1×TAE緩沖液電泳30min，電壓為4-5V/cm的條件下凝膠成像。

8.一種如權利要求1所述檢測方法的應用，其特征在于：用于對亞細亞鐮刀菌的鑒別，或用于監控亞細亞鐮刀菌對農作物或飼料的污染。

9.根據權利要求8所述檢測方法的應用，其特征在于：所述的用于對亞細亞鐮刀菌的鑒別是指：從病原菌基因組樣本中提取的DNA，當電泳后的凝膠成像中172bp處存在特異條帶，該病原菌為亞細亞鐮刀菌。

10.根據權利要求8所述檢測方法的應用，其特征在于：所述的用于亞細亞鐮刀菌對農作物污染的監控是指：從農作物籽粒或飼料樣本中提取的農作物或飼料DNA，當電泳后的凝膠成像中172bp處存在特異條帶，該農作物籽粒或飼料樣本已經被亞細亞鐮刀菌污染。