[發(fā)明專利]一種卵黃免疫球蛋白緩釋制劑的制備方法和用途

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110420070.9
• 申請日: 2011-12-15
• 公開（公告）號: CN102488899A
• 公開（公告）日: 2012-06-13
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 焦月;趙鋼;王國新;王智佳;沈麗麗
• 申請（專利權(quán)）人: 天津濟命生生物科技有限公司
• 主分類號: A61K39/395
• 分類號: A61K39/395;C07K16/08;A61P31/04
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域：

本發(fā)明涉及一種預防或治療人類的腸道傳染病生物新藥的制備以及開發(fā)，特別是一種卵黃免疫球蛋白緩釋制劑的制備方法和用途。

背景技術(shù)：

近年來，國外已有報道證實當用病毒作抗原免疫產(chǎn)蛋母雞時，蛋黃中能產(chǎn)生相應的抗該病毒的特異性多克隆卵黃免疫球蛋白(IgY)，且產(chǎn)量大，便于提純，尤其卵黃免疫球蛋白穩(wěn)定性好，其耐酸堿和熱能力與免疫球蛋白(IgG)相似，能抵抗幼齡動物的胃酸屏障，卵黃免疫球蛋白可使實驗動物獲得對應病原體引起的胃腸道感染性疾病的免疫保護作用。因此，可用于防治經(jīng)胃腸道感染的病毒性疾病，如輪狀病毒引起的嬰幼兒秋冬腹瀉。并且，引起消化道感染性疾病的病原體大多分布在消化道粘膜表面，而卵黃免疫球蛋白抗體大部分經(jīng)過消化道代謝，只有很少的一部分被吸收入血。因此，抗原特異性的卵黃免疫球蛋白有利于消化道局部大量病原體特異性的抗體，從而大大地提高治療效果。在胃腸道感染性疾病治療上有廣闊的應用前景，引起了廣泛的關(guān)注。IgY在食品、醫(yī)藥、生物等方面的應用越來越廣泛.其作用機理逐漸被闡明和完善。IgY已被證明能有效替代抗生素預防和治療因耶爾森菌、腸毒性大腸桿菌、沙門氏菌、葡萄球菌、幽門螺桿菌等感染引起的胃腸道疾病。

卵黃作為特異抗體IgY的來源有許多優(yōu)點。如：母雞易于飼養(yǎng)，費用不高；收集雞蛋方便，無需抽動物血，無損傷，符合現(xiàn)代動物保護規(guī)則；產(chǎn)生有效免疫反應所需抗原量小，尤其是高度保守的哺乳動物蛋白質(zhì)對種系發(fā)生學上距離較遠的禽類通常有較強的免疫原性。

在免疫治療方面，因雞抗體耐酸、耐熱且性能穩(wěn)定，可經(jīng)用于預防或治療年幼動物或人類的腸道傳染病，如嬰兒防病食品等。特別是抗生素或其它藥物的使用存在問題時，IgY成為首選。

發(fā)明內(nèi)容：

本發(fā)明的目的是要提供一種安全、可靠、經(jīng)濟簡便、易于推廣，適用面廣的針對輪狀病毒的卵黃IgY抗體緩釋制劑及其制備方法與應用。

一種卵黃免疫球蛋白緩釋制劑的制備方法和用途，它是由人型輪狀病毒為免疫原，牛型WC3株為病毒生產(chǎn)株，MA-104細胞為病毒培養(yǎng)宿主細胞，通過病毒培養(yǎng)，收獲病毒液，經(jīng)純化、超濾濃縮獲得原液，注射到SPF母雞體內(nèi)，經(jīng)此免疫后，取雞蛋卵黃經(jīng)分離提取、純化得到卵黃免疫球蛋白。再加入卵磷脂制成注射液。用于預防或治療因耶爾森菌、腸毒性大腸桿菌、沙門氏菌、葡萄球菌、幽門螺桿菌等感染引起的胃腸道疾病。

所用人型輪狀病毒為Wa株和猴型SA11株的二聯(lián)體。

一種卵黃免疫球蛋白緩釋制劑的制備方法：

(1)細胞培養(yǎng)

將MA-104細胞用旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶連續(xù)傳代培養(yǎng)，用胰蛋白酶處理細胞，加入病毒液，然后吸去病毒液，以維持液繼續(xù)培養(yǎng)，至細胞病變達75％時收獲病毒液。

(2)病毒培養(yǎng)液的純化

病毒培養(yǎng)液反復凍融三次，間斷超聲破碎，離心，上清中加入PEG6000，放置過夜，離心，沉淀用PBS重懸，上樣至Sepharose?GL-4B進行凝膠過濾，收集主峰后超濾濃縮，濃縮液進行免疫學、蛋白濃度和CPE測定。

(3)動物免疫

采用六月齡無特定病原體(SPF)產(chǎn)蛋母雞注射滅活雙價病毒液+不完全福氏佐劑。待卵黃免疫球蛋白中和效價達400單位/ml后收集雞蛋進行卵黃免疫球蛋白提取。

(4)免疫雞蛋的處理

免疫雞蛋表面無菌處理，去蛋清后勻化處理，勻化后靜置過夜。

(5)免疫球蛋白純化

上清加入飽和硫酸銨梯度沉淀，靜置，離心，沉淀用PBS重懸，經(jīng)Sepharose?4FF柱層析凝膠過濾純化，收集免疫球蛋白峰經(jīng)超濾脫鹽濃縮。

(6)制劑制備

加入卵磷脂制成注射液。

一種卵黃免疫球蛋白緩釋制劑的用途：

(1)在疾病預防方面的應用

研究表明，IgY能抵抗腸道中胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶的消化。可以在動物飼料或嬰幼兒食品添加劑中加入一定量的針對某些特定疾病的IgY，以使其獲得有效的被動免疫。

(2)在疾病治療方面的應用