[發明專利]一種具有抗氧化活性的茶樹菇發酵液多糖的制備方法

無效

• 申請號: 201110419934.5
• 申請日: 2011-12-15
• 公開（公告）號: CN102533903A
• 公開（公告）日: 2012-07-04
• 發明（設計）人: 鄧超;陳敬華;程詠梅;滕麗萍
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C12P19/04
• 分類號: C12P19/04;C12R1/645
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種具有抗氧化活性的茶樹菇發酵液多糖的制備方法。屬生物工程技術應用領域。

背景技術

茶樹菇屬擔子菌綱，糞銹傘科，田菇屬，又名茶菇、油茶菇、神菇。是近年來發展起來的一種食用菌新品種。茶樹菇營養豐富，蛋白質含量高，含有人體必需的氨基酸，并且有豐富的B族維生素和鉀、鈉、鈣、鎂、鐵、鋅等礦質元素。中醫認為該菇性平、甘溫、無毒，具有較高的藥用價值，有清熱、平肝、明目、健脾的功效。是一種集營養、保健、理療于一身的綠色食品。目前，人們獲得真菌多糖的途徑主要是從真菌子實體提取而得，但隨著需求量的增大，野生資源有限，人工栽培周期長且容易污染雜菌，受病蟲害侵蝕，而菌絲體培養周期短，染菌少，故應該探索在生物反應器內進行液體深層發酵以獲取多糖的途徑，為開辟工業化液體深層發酵生產真菌多糖提供可靠依據。通過深層發酵獲得的多糖，具有一定的抗氧化活性，可應用于保健品行業。

發明內容

本發明的目的是提供一種具有抗氧化活性的茶樹菇發酵液多糖的制備方法

本發明的技術方案為：將茶樹菇子實體通過組織分離法接入固體斜面培養基上培養，待長好后移至搖瓶種子液體培養基中培養，將培養好的種子液接入搖瓶發酵液體培養基培養。發酵結束后，離心取上清液濃縮，乙醇沉淀，脫蛋白，脫色，凝膠層析柱純化，透析后冷凍干燥得到茶樹菇發酵液多糖。最后進行體外抗氧化實驗。

本發明發明的茶樹菇發酵液多糖具有一定的抗氧化活性。可以作為原料應用于保健食品等領域。

上述技術方案中，斜面培養基為PDA培養基，搖瓶種子培養基為PDA1L加磷酸二氫鉀1g，硫酸鎂0.5g，牛肉膏2g，蛋白胨1g，pH6.0，發酵培養基為玉米粉2g/100mL、酵母粉0.3g/100mL、磷酸二氫鉀0.2g/100mL、硫酸鎂0.05g/100mL，培養條件為起始pH6.0，250mL三角瓶裝培養基100mL于25℃，150r/min，振蕩培養7d。多糖提取方法為發酵結束后離心取上清液，用旋轉蒸發儀濃縮至原體積的1/5，加入3倍體積95％乙醇在4℃醇析，沉淀物用蒸餾水復溶后用木瓜蛋白酶和Sevage法聯合去除游離蛋白，H₂O₂脫色、葡聚糖凝膠G-200層析柱純化，蒸餾水透析，冷凍干燥后得到茶樹菇發酵液多糖。抗氧化試驗將總還原能力，清除羥基自由基、超氧陰離子、DPPH的能力作為指標。

具體實施方式

下面的實例將具體說明本發明的操作方法，但不能作為對本發明的限定。

實例一

1.發酵液制備

出發菌種為市售茶樹菇(Agrocybe?aegirit)；

(1)組織分離法

斜面培養基：PDA培養基，含1.5％～2.0％瓊脂，pH自然；

組織分離方法：將子實體外表用酒精進行表面消毒后，放入超凈工作臺上，用消毒過的刀片與鑷子切取菌柄與菌蓋交界處組織塊接入斜面培養基上，pH自然，置于25℃溫度下暗培養，5d后菌絲開始萌發，每隔2d檢查1次，除去污染，選擇菌絲生長速度快和長勢強的試管作為純母種；

(2)搖瓶種子培養

搖瓶種子培養基：PDA1L加磷酸二氫鉀1g，硫酸鎂0.5g，牛肉膏2g，蛋白胨1g，pH6.0；

培養方法：從斜面菌種中取3～4塊黃豆大小相同的菌塊，接種于搖瓶種子培養基中，250mL三角瓶裝培養基100mL于25℃，150r/min，振蕩培養7d；

(3)搖瓶發酵培養

發酵培養基：玉米粉2g/100mL、酵母粉0.3g/100mL、磷酸二氫鉀0.2g/100mL、硫酸鎂0.05g/100mL；

培養方法：將培養好的種子以15％的接種量接入搖瓶發酵培養基中25℃，150r/min，振蕩培養7d；

(4)發酵液濃縮，脫蛋白，脫色，凝膠柱層析，透析