[發(fā)明專利]各種癌癥病理演變前期MICRORNA-520水平原位雜交檢測試劑盒及檢測方法和應用

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110419635.1
• 申請日: 2011-12-15
• 公開（公告）號: CN102533979A
• 公開（公告）日: 2012-07-04
• 發(fā)明（設計）人: 張云福;裘建英;裘霖;張玉麗
• 申請（專利權(quán)）人: 蘇州福英基因科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 上海翼勝專利商標事務所(普通合伙) 31218
• 代理人: 翟羽;施春花

技術(shù)領域

本發(fā)明涉及生物檢測領域，更具體地說，是涉及與各種癌癥病理演變RNA表達改變(病理演變過程)的相關(guān)檢測技術(shù)。????

背景技術(shù)

根據(jù)國內(nèi)外權(quán)威機構(gòu)提供的資料，我國每年癌癥的新增人數(shù)260萬，死亡人數(shù)近210萬，患者700多萬，全球每年新增癌癥患者800萬，死亡人數(shù)接近800萬，患者約有8400多萬人，到2020年以上人數(shù)將翻一番，這是一組可怕的數(shù)字。癌癥診治成本越來越高，按癌癥患者的年治療費用20萬（貧窮地區(qū)可能偏高，發(fā)達地區(qū)可能遠遠高出20萬），700多萬患者，每年的花費是1.4萬億人民幣，扣除成本35%約4千億，每年約有1萬億人民幣白白消耗了。而且，癌癥患者大部分會在治療后不久死亡。因此，現(xiàn)有的臨床癌癥診治模式一定要改變，本發(fā)明的創(chuàng)新點是提前做到預防性篩查，然后及時介入預防性調(diào)控和預防性治療，做到基因水平癌癥的治未病。

2005年美國衛(wèi)生研究院、癌癥研究院、疾控中心等八家單位做了一個年度報告，對1972年發(fā)起的抗癌大戰(zhàn)進行回顧，報告認為人類在抗癌大戰(zhàn)中是失敗，結(jié)論是癌癥死亡率沒有降低，其列舉出造成抗癌大戰(zhàn)失敗的幾個因素是：1.腫瘤細胞異質(zhì)性（多態(tài)性）；2.腫瘤細胞耐藥性；3.抗癌藥物設計思路不完善（動物模型設計不科學）等。同時，該報告中亦提出應重新審視現(xiàn)有診治癌癥的措施。

本發(fā)明人在長期研究中發(fā)現(xiàn)，導致癌癥死亡率不降的重要原因是不能做到真正的早期診斷。依照現(xiàn)有的臨床醫(yī)學影像（B超、CT、核磁共振成像等）及和其它生化（癌抗原、癌胚抗原、糖類激素、細胞膜因子、細胞核因子、細胞流式技術(shù)）指標來診斷癌癥，都是腫瘤形成后診斷，前者要有組織學變化或已有占位性病變，后者大部分是腫瘤形成后所分泌、釋放、或腫瘤的標記物。傳統(tǒng)臨床觀念認為占位性癌塊在2公分下是屬于早期癌癥的診斷，這一概念值得認真討論，2公分以下癌塊屬早期這一界定科學性是不夠嚴謹?shù)模瑥募毎麑W角度來分析，1公分的腫塊約有一億個腫瘤細胞，2公分的腫塊其三維空間的細胞疊加數(shù)遠不止2億個腫瘤細胞，從癌變前期到單克隆癌細胞產(chǎn)生及形成2公分的癌塊，其病理演變過程相當長，可能是5年或10年、甚至是10年以上（特殊病例除外），很難證實的是在這個病理演變過程中，腫塊是癌癥唯一的發(fā)生地和單獨的病灶，可能癌細胞早已遷移到其它組織或器官生長。臨床研究早已證實，一旦形成腫塊的同時，其它癌細胞通過不同途徑遷移到其它部位克隆生長，一旦切除原發(fā)灶后，其它器官復發(fā)灶或多發(fā)癌塊灶先后形成。因此，在臨床上以2公分以下的癌腫塊大小來界定早期與否，不夠嚴謹（有些病例，在發(fā)現(xiàn)原發(fā)病灶時，同時發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)移病灶，不在我們表述的內(nèi)容中），其實這時已經(jīng)是晚期診斷和晚期治療，這是導致癌癥死亡率不降的真正原因。

隨著分子生物技術(shù)日益完善，功能基因組學，癌癥基因組學等研究的深入展開，為了尋求更早期的診斷癌癥、治療癌癥、以及預防癌癥，已取得長足進步。至今，我們已有可能在基因的一級轉(zhuǎn)錄功能產(chǎn)物（mRNA水平或microRNA）上做更精確的早期篩查和診斷，在癌變前期或癌細胞形成（單克隆）前,就可以做到早期預測和篩查。本發(fā)明采用核酸原位雜交技術(shù)，選擇多組臨床標本（癌癥病人、高危人群、正常對照），對MICRORNA-520基因與各種癌癥的早期預警進行檢測分析。

微小核糖核酸(microRNA/miRNA)是一段長度約為22核苷酸的寡核糖核酸分子，它們可以藉由調(diào)控mRNA來抑制轉(zhuǎn)譯作用或是造成mRNA的降解來降低基因的表現(xiàn)。近來有許多研究發(fā)現(xiàn)，miRNA與癌癥具有高度的相關(guān)性。因此推論miRNA可能是癌化過程的一個導因。到目前為止，在人體上有超過700個miRNA被發(fā)現(xiàn)，而大約有100左右的miRNA被確認與人類癌癥具有相關(guān)性，這其中包含有食道癌、乳癌、血癌、肺癌、腦癌、肝癌、直腸結(jié)腸癌、膠質(zhì)細胞瘤、垂體瘤等多種腫瘤在食道癌細胞中，我們發(fā)現(xiàn)抑癌蛋白質(zhì)-LATS2的表現(xiàn)受到miR-373所抑制并且在食道癌細胞株與食道癌臨床組織中，LATS2與miR-373的表現(xiàn)有相反的趨勢。我們也發(fā)現(xiàn)在食道癌細胞中抑制或過度表現(xiàn)miR-373，細胞的生?長會受到影響。綜合上述結(jié)果，我們發(fā)現(xiàn)miR-330和miR-373均可以透過調(diào)?控其target?proteins來影響食道癌細胞的生長。另外，此研究也提供將來在臨床上治療食道癌的新方向。