[發明專利]一種直投式凝結芽孢桿菌發酵劑的制備方法

有效

• 申請號: 201110418728.2
• 申請日: 2011-12-15
• 公開（公告）號: CN102433279A
• 公開（公告）日: 2012-05-02
• 發明（設計）人: 王海寬;戚薇;周超
• 申請（專利權）人: 天津科技大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/04;C12R1/07
• 代理公司: 天津盛理知識產權代理有限公司 12209
• 代理人: 王來佳

技術領域

本發明屬于生物制劑領域，是一種直投式凝結芽孢桿菌發酵劑的制備方法。

背景技術

凝結芽孢桿菌是一類具有端生芽孢結構的兼性厭氧桿菌，是對宿主有益的正常微生物。其被廣泛添加到各種食品和飼料中，食用后在體內的繁殖和定植能力強，活菌數高，對人體健康十分有利。凝結芽孢桿菌對人體的保健作用主要通過兩種途徑：一是凝結芽孢桿菌菌體本身的作用，它可以產生大量有益代謝產物，抑制腐敗菌的生長，維持機體腸道菌群平衡；二是其代謝產物，可促進腸蠕動，增強酶的活力，幫助機體消化吸收。

直投式發酵劑(directed?vat?set，DVS)是指一系列高度濃縮和標準化的干燥發酵劑菌種，可直接加入熱處理的原料進行發酵而無需對其進行活化、擴培等其他預處理工作。目前國內外直投式凝結芽孢桿菌發酵劑尚未有產品。直投式凝結芽孢桿菌制劑具有以下優點：活菌含量高，接種量小，生產成本低；保藏期長；方便運輸、購買；可有效防止菌種污染及其退化，提高產品品質；無需擴大培養，有效縮短生產周期，提高勞動生產率。

發明內容

本發明的目的在于克服現有技術的不足，提供一種成本低、操作簡單、具有獨特優勢的直投式凝結芽孢桿菌發酵劑的制備方法。

本發明實現目的的技術方案如下：

一種直投式凝結芽孢桿菌發酵劑的制備方法，將凝結芽孢桿菌發酵液進行濃縮，發酵液濃縮條件為：離心轉速6000r/min，離心20min，離心溫度為4℃，添加保護劑，所采用的保護劑為含有5％m/m蔗糖和10％m/m麥芽糊精的水溶液，將菌泥加入到保護劑的水溶液中，采用真空干燥法干燥，干燥溫度選為60℃，干燥壓力選為12000Pa。

而且，所述凝結芽孢桿菌的名稱為TQ33，分類名稱Bacillus?coagulans，保藏編號為：CGMCC?No.5233，保藏日期：2011年9月9日，保藏地址為：北京市朝陽區北辰西路1號院3號，保藏單位：中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心。

而且，所述凝結芽孢桿菌液體種子培養基為g/L：蛋白胨20.0、酵母膏10.0、葡萄糖20.0、CaCO₃為10.0，pH7.2-7.4；培養條件為：37℃培養20h。

而且，所述菌泥與保護劑的水溶液的體積比1∶2-5。

而且，所述凝結芽孢桿菌真空干燥存活率為90.3％，活菌數達3.24×10¹⁰cfu/g。

而且，所述凝結芽孢桿菌發酵劑按1‰的接種量應用于液態發酵，最高活菌數為8.1×10⁹cfu/mL。

而且，所述凝結芽孢桿菌發酵劑按1‰的接種量應用于固態發酵，最高活菌數為1.0×10¹⁰cfu/g。

本發明的優點和積極效果：

1、本發明中凝結芽孢桿菌TQ33菌株通過高密度放大培養后，采用真空干燥法制備菌體發酵劑。用本方法生產的直投式凝結芽孢桿菌發酵劑的存活率為90.3％，活菌數達3.56×10¹⁰cfu/g，按照1‰的接種量便可達到理想的液態和固態發酵效果。基于本菌株開發了一種新型高活性低成本的直投式凝結芽孢桿菌發酵劑的制備方法。

2、本發明首次采用真空干燥法制備直投式凝結芽孢桿菌發酵劑，與原液態種子接種相比，發酵劑具有接種量小，直接使用，節約勞動力，縮短生產周期；可有效地防止菌種污染及退化；保存管理方便，產品品質穩定等優勢。

3、本發明確定了凝結芽孢桿菌在濃縮過程中采用離心轉速6000r/min，4℃下離心20min，離心得率為93.27％。

4、本發明確定了菌體真空干燥過程中保護劑為含5％m/m蔗糖和10％m/m麥芽糊精的水溶液，最終凝結芽孢桿菌存活率為90.3％，活菌數為3.24×10¹⁰cfu/g。

5、用本發明方法制備的直投式凝結芽孢桿菌發酵劑按1‰的接種量應用于液態發酵，最高活菌數為8.1×10⁹cfu/mL。

6、用本發明方法制備的直投式凝結芽孢桿菌發酵劑按1‰的接種量應用于固態發酵，最高活菌數為1.0×10¹⁰cfu/g。

附圖說明

圖1為本發明200L發酵罐生長曲線；