[發明專利]30種氨基酸同時定量檢測方法及試劑盒制備

無效

• 申請號: 201110417088.3
• 申請日: 2011-12-14
• 公開（公告）號: CN103163226A
• 公開（公告）日: 2013-06-19
• 發明（設計）人: 劉麗宏;李鵬飛;李丹;張緒得;陶蓓蓓
• 申請（專利權）人: 劉麗宏;李鵬飛;李丹
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N27/62
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種高靈敏30種氨基酸同時定量檢測試劑盒，其特征在于由特定濃度的穩定同位素內標樣本、質控樣本、衍生化試劑、流動相調節液組成。

2.根據權利1所述的30種氨基酸同時定量檢測試劑盒的制備方法，其特征在于包括如下步驟：(1)穩定同位素內標凍干粉的制備；(2)質控樣本的配制；(3)衍生化試劑的制備；(4)流動相調節液的配制。

3.一種30種氨基酸同時定量檢測方法，包括：

(1)濃縮儲備液和日常工作液的配制：

取“穩定同位素內標凍干粉”用有機溶劑充分溶解，混勻，即為濃縮儲備液，使用效期1個月；濃縮儲備液用有機溶劑稀釋適宜倍數，即為日常工作液，使用效期1周。

(2)樣本預處理：

取一定量的樣本，加入日常工作液，渦流，高速離心取上清液，吹干或凍干或揮干，加入適量的衍生化試劑衍生化一定時間，吹干或凍干或揮干，加入復溶液復溶。

(2)液相分離：

a.采用C₁₈、C₈或氰基鍵和硅膠作固定相；

b.流動相：甲醇；乙腈；乙酸；甲酸；三氟乙酸；七氟丁酸；乙酸銨；甲酸銨；二乙胺；三乙胺；等度或梯度洗脫；控制流速。

(3)質譜測定：電噴霧離子源；大氣壓化學電離源；正離子方式。

4.根據權利3所述的30種氨基酸同時定量檢測方法，其特征在于同時定量檢測30種氨基酸(精氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、天門冬氨酸、瓜氨酸、谷氨酸、纈氨酸、甘氨酸、酪氨酸、丙氨酸、鳥氨酸、異亮氨酸、賴氨酸、蘇氨酸、色氨酸、組氨酸、γ-氨基丁酸、絲胺酸、牛磺酸、脯氨酸、半胱氨酸、同型半胱氨酸、α-氨基正丁酸、肌氨酸、δ-羥基賴氨酸、羥基脯氨酸、1-甲基組氨酸、3-甲基組氨酸、焦谷氨酸)中的一種或多種，包含且不限于此30種氨基酸。

5.根據權利3所述的30種氨基酸同時定量檢測方法，其特征在于用乙腈、甲醇、三氯醋酸或高氯酸等蛋白沉淀劑進行蛋白沉淀。

6.根據權利3所述的30種氨基酸同時定量檢測方法，其特征在于用鹽酸正丁醇進行衍生化處理。

7.根據權利3所述的30種氨基酸同時定量檢測方法，其特征在于用穩定同位素內標進行定量檢測。

8.根據權利3所述的30種氨基酸同時定量檢測方法，其特征在于其所使用的流動相為：甲醇；乙腈；乙酸；甲酸；三氟乙酸；七氟丁酸；乙酸銨；甲酸銨；二乙胺；三乙胺；反相色譜等度或梯度分離。