[發明專利]一種提取河蟹絨毛DNA的方法有效
| 申請號： | 201110413783.2 | 申請日： | 2011-12-13 |
| 公開（公告）號： | CN102424820A | 公開（公告）日： | 2012-04-25 |
| 發明（設計）人： | 王成輝;周陸;王軍 | 申請（專利權）人： | 上海海洋大學 |
| 主分類號： | C12N15/10 | 分類號： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 201306 上*** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 提取 河蟹 絨毛 dna 方法 | ||
【權利要求書】：
1.一種提取河蟹DNA的方法，其特征在于包括如下步驟：
(1)剪取河蟹絨毛；
(2)提取河蟹絨毛DNA，步驟如下：
a.將第(1)步剪取的河蟹絨毛加裂解緩沖液和蛋白酶K進行消化，其中裂解緩沖液的成分與濃度為：0.05M?EDTA，2％SDS，0.01M?Tris-Cl，0.3M乙酸鈉，10mg/ml?DTT；
b.將步驟a得到的消化液離心，取上清液加飽和NaCl溶液和氯仿，混勻；
c.離心，取上清液加入異丙醇；
d.離心沉淀DNA；
e.洗滌DNA，輕搖混勻；
f.離心，將沉淀DNA烘干；
g.在烘干后的DNA加去離子水或TE溶液，并加入RNA酶去除DNA中的RNA，保存備用。
2.根據權利要求1所述的提取河蟹DNA的方法，其特征在于：第(1)步中，在剪取河蟹螯足上的絨毛的過程中剪取靠近基部毛囊部的絨毛。
3.根據權利要求1所述的提取河蟹DNA的方法，其特征在于：在步驟a中，河蟹絨毛的根數與加裂解緩沖液和蛋白酶K的量之間的關系是：河蟹絨毛15-20根，加500ml裂解緩沖液和濃度為20mg/ml的蛋白酶K?20μL，于56℃的的烘箱中過夜消化，直至澄清的裂解緩沖液轉變為混濁呈橙黃色為止。
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