[發明專利]人溶菌酶-人堿性成纖維細胞生長因子融合基因的設計及表達

無效

• 申請號: 201110410610.5
• 申請日: 2011-12-12
• 公開（公告）號: CN102492674A
• 公開（公告）日: 2012-06-13
• 發明（設計）人: 鄔敏辰;韋敬土;龔燕燕;羅秋玲;劉曉彤
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C12N9/36
• 分類號: C12N9/36;C12N15/62;C12N15/10;C12N15/81;C12N1/19;C12R1/84
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種具有多重功能的人溶菌酶-人堿性成纖維細胞生長因子融合蛋白，其核苷酸和氨基酸序列分別為SEQ?ID?NO：1和SEQ?ID?NO：2。

2.如權利要求1所述生產人溶菌酶基因-人堿性成纖維細胞生長因子融合基因的方法，其特征在于使用重疊PCR方法進行融合。

3.如權利要求1所述人溶菌酶-人堿性成纖維細胞生長因子融合基因工程菌構建的方法，其特征在于將重疊PCR的目的基因進行克隆、測序；測序正確的pUCm-T-hly-thr-hbfgf與質粒pPIC9K均用EcoR?I和Not?I進行雙酶切，回收的酶切產物在T4DNA連接酶的作用下進行連接，得到重組質粒pPIC9K-hly-thr-hbfgf，并對重組質粒進行測序鑒定；用Sac?I對測序正確的pPIC9K-hly-thr-hbfgf進行線性化，按照畢赤酵母表達手冊進行電轉化、篩選，得到高拷貝的畢赤酵母重組子GS/hly-thr-hbfgf。

4.根據權利要求1所述產生人溶菌酶-人堿性成纖維細胞生長因子融合蛋白的發酵方法，利用高拷貝畢赤酵母重組子GS/hly-thr-hbfgf在26℃、pH?6.5條件下，用2.0％甲醇誘導108h，離心上清液為融合蛋白發酵液，經截留分子量為10kDa的超濾膜濃縮，再經Sephadex?G-75凝膠過濾層析純化，純化后經SDS-PAGE檢測為單一條帶，并顯示重組人溶菌酶-人堿性成纖維細胞生長因子融合蛋白分子量約為33kDa。