[發明專利]一種棕色蘑菇三級菌種擴繁體系的建立方法

有效

• 申請號: 201110408698.7
• 申請日: 2011-12-09
• 公開（公告）號: CN103155785A
• 公開（公告）日: 2013-06-19
• 發明（設計）人: 班立桐;黃亮;王玉;楊麗維;孫茜;孫少起
• 申請（專利權）人: 天津市金三農農業科技開發有限公司
• 主分類號: A01G1/04
• 分類號: A01G1/04
• 代理公司: 天津市杰盈專利代理有限公司 12207
• 代理人: 朱紅星

1.一種棕色蘑菇三級菌種擴繁體系的建立方法，其特征在于它包括母種、液體菌種、栽培種的三級菌種擴繁組合在一起，建立的一種擴繁體系，其方法如下：

（1）母種的制備：

1）母種培養基配方，即草炭土培養基(g/L)：草炭土600g，葡萄糖20g，麥粒100g，硫酸鎂1.5g，磷酸二氫鉀1g，蛋白胨2g，水1000mL；

2）配制培養基：取適量草炭土、麥粒，加入1000ml的清水中煮沸20～30min，濾液；向濾液中加入硫酸鎂、磷酸二氫鉀、蛋白胨、葡萄糖、瓊脂，待藥品溶化后，補足水分，分裝試管；

3）滅菌：121℃，滅菌20min，滅菌結束后，取出擺斜面；

4）接種、培養：嚴格按照無菌操作將棕色蘑菇菌絲接種于斜面中部；25℃恒溫培養至滿管；

5）挑雜、保存：將染菌、生長狀態不佳的斜面去除后，將剩余斜面置于4℃冰箱保存，備用；

（2）液體菌種的制備：

1）液體菌種配方，即種子培養基（g/L）：馬鈴薯200，葡萄糖?20，蛋白胨?2，磷酸二氫鉀?2，硫酸鎂?1，VB1?0.01，pH自然；麩皮發酵培養基為（g/L）：麩皮?120，葡萄糖?15，蛋白胨?2，pH自然；

2）配制種子液培養基：稱取馬鈴薯處理后，加水煮沸30分鐘，過濾，再加入葡萄糖、蛋白胨、磷酸二氫鉀、硫酸鎂?1，VB1，充分溶解后趁熱過濾，分裝，50mL/250mL三角瓶；

3）滅菌，121℃，滅菌20min；

4）制備種子液：滅菌結束后，取出放涼，嚴格按照無菌操作接種，取5塊0.5?cm²新鮮斜面菌種接種于種子培養基中，25℃，150rpm搖床培養7天；

5）配制發酵培養基：取麩皮，加入清水煮沸20-30min，濾液，向麩皮煮液中加入葡萄糖、蛋白胨、硫酸鎂、磷酸二氫鉀，待藥品溶解后，加入清水補足水分，分裝，100mL/250mL三角瓶；

6）滅菌：121℃，滅菌20min；

7）接種、培養：將制備好的種子液以接種量?8%移入裝發酵培養基的250mL三角瓶中，25℃，150rpm培養7天，即得棕色蘑菇液體菌種；

8）挑雜：每日通過外觀觀察發酵液是否渾濁，有酸味，則說明被細菌污染，除去；

（3）栽培種的制作：

1）麥粒土培養基(%)：麥粒92，石膏5，草炭土3；

2）煮麥：選擇無蟲蛀的小麥，倒入沸水中煮20～25分鐘，并不斷攪拌，煮至麥粒無白心時，立即停火將麥粒撈出，晾至表面無水跡；

　　3）配料：將石膏、草炭土按比例加入，并將其翻拌均勻，即可裝瓶；　　

　　4）裝瓶滅菌：121℃，滅菌2～2.5小時；

　　5）接種：將所制備的液體菌種，以15%的接種量均勻噴入栽培種中，嚴格按照無菌操作要求操作；

6）培養：將接種后的栽培種置于25℃恒溫培養室中遮光培養，至滿瓶；

7）挑雜：將染菌、生長狀態不佳的栽培種去除后，將剩余菌種保存備用。