[發明專利]一種棕色蘑菇三級菌種擴繁體系的建立方法

有效

• 申請號: 201110408698.7
• 申請日: 2011-12-09
• 公開（公告）號: CN103155785A
• 公開（公告）日: 2013-06-19
• 發明（設計）人: 班立桐;黃亮;王玉;楊麗維;孫茜;孫少起
• 申請（專利權）人: 天津市金三農農業科技開發有限公司
• 主分類號: A01G1/04
• 分類號: A01G1/04
• 代理公司: 天津市杰盈專利代理有限公司 12207
• 代理人: 朱紅星

技術領域

本發明提供了涉及褐蘑菇的栽培方法，更具體的說是一種棕色蘑菇三級菌種擴繁的方法。

背景技術

棕色蘑菇（Agaricus?brunnescens?Peck），是蘑菇中的珍稀類品種，屬于擔子菌綱(Basidiomycotina)、傘菌目(Agaritales)、蘑菇科(Agaricaceae)、蘑菇屬?(garicus)。棕色蘑菇俗稱棕蘑，是波希美亞種。該菌株產量高、菇質優良、口感鮮嫩，其菇蓋為自然棕褐色，菌柄白色，肉質致密緊實。現在所有的白色雙孢蘑菇品種均為棕色蘑菇的白色變種，也就是說棕色蘑菇是白色雙孢蘑菇的野生祖先。棕色蘑菇,別名白蘑菇、洋菇,屬于擔子菌綱、傘菌目、蘑菇科、蘑菇屬。棕色蘑菇營養豐富、味道鮮美,據報導鮮蘑菇含蛋白質3%—4%,脂肪0.2%—0.3%,碳水化合物2.4%—3.8%,可消化率達70%—90%,享有“植物肉”之稱。蘑菇的氨基質酸組成較全面,尤其富含人體必需的賴氨酸等。棕色蘑菇還含有豐富的鐵、鉀、鈣等礦質元素。還含有硫氨素、核黃素、煙酸、抗壞血酸等多種維生素及酶類。由于含有較高的不飽和脂肪酸,故多食用蘑菇對降低血脂有明顯作用,用蘑菇罐頭加工預煮液制成的藥物對醫治遷延性肝炎、慢性肝炎、肝腫大、早期肝硬化等均有顯著療效。隨著人們追求天然、返璞歸直潮流的到來，棕色蘑菇在市場上受到廣大消費者的追捧，是一個很好的商業品種。

目前，棕色蘑菇菌種培養主要采用固體培養方法，制作周期長，加上其制作時間正值高溫季節，導致生產成本上升。而液體培養是采用液體基質質發酵來進行發酵培養菌種的生產，其原理是：在發酵罐或三角瓶中，采用液體培養基質，通入無菌空氣加以攪拌或振蕩，增加培養基質中的溶氧含量，提供菌絲體呼吸代謝所需要的氧氣，并控制適宜的外界條件，使得菌體在液體深處繁殖發育，獲得大量的菌絲體或代謝產物。

由于棕色蘑菇具有較好的市場前景，但目前對其栽培方法的研究較少，尤其是較之雙孢蘑菇三級菌種繁育時間較長，本發明旨在通過對棕色蘑菇液體菌種的制備和栽培種的制作，研究出棕色蘑菇三級菌種的最佳擴繁方案，將對棕色蘑菇的大規模工廠化生產具有一定的指導意義。

發明內容

本發明公開的技術內容如下：

一種棕色蘑菇三級菌種擴繁體系的建立方法，其特征在于它包括母種、液體菌種、栽培種的三級菌種擴繁組合在一起，建立的一種擴繁體系，其方法如下：

（1）母種的制備：

1）母種培養基配方，即草炭土培養基(g/L)：草炭土600g，葡萄糖20g，麥粒100g，硫酸鎂1.5g，磷酸二氫鉀1g，蛋白胨2g，水1000mL；

2）配制培養基：取適量草炭土、麥粒，加入1000ml的清水中煮沸20～30min，濾液；向濾液中加入硫酸鎂、磷酸二氫鉀、蛋白胨、葡萄糖、瓊脂，待藥品溶化后，補足水分，分裝試管；

3）滅菌：121℃，滅菌20min，滅菌結束后，取出擺斜面；

4）接種、培養：嚴格按照無菌操作將棕色蘑菇菌絲接種于斜面中部；25℃恒溫培養至滿管；

5）挑雜、保存：將染菌、生長狀態不佳的斜面去除后，將剩余斜面置于4℃冰箱保存，備用；

（2）液體菌種的制備：

1）液體菌種配方，即種子培養基（g/L）：馬鈴薯200，葡萄糖?20，蛋白胨?2，磷酸二氫鉀?2，硫酸鎂?1，VB1?0.01，pH自然；麩皮發酵培養基為（g/L）：麩皮?120，葡萄糖?15，蛋白胨?2，pH自然；

2）配制種子液培養基：稱取馬鈴薯處理后，加水煮沸30分鐘，過濾，再加入葡萄糖、蛋白胨、磷酸二氫鉀、硫酸鎂?1，VB1，充分溶解后趁熱過濾，分裝，50mL/250mL三角瓶；

3）滅菌，121℃，滅菌20min；

4）制備種子液：滅菌結束后，取出放涼，嚴格按照無菌操作接種，取5塊0.5?cm²新鮮斜面菌種接種于種子培養基中，25℃，150rpm搖床培養7天；

5）配制發酵培養基：取麩皮，加入清水煮沸20-30min，濾液，向麩皮煮液中加入葡萄糖、蛋白胨、硫酸鎂、磷酸二氫鉀，待藥品溶解后，加入清水補足水分，分裝，100mL/250mL三角瓶；

6）滅菌：121℃，滅菌20min；

7）接種、培養：將制備好的種子液以接種量?8%移入裝發酵培養基的250mL三角瓶中，25℃，150rpm培養7天，即得棕色蘑菇液體菌種；

8）挑雜：每日通過外觀觀察發酵液是否渾濁，有酸味，則說明被細菌污染，除去；

（3）栽培種的制作：