[發明專利]用于同時檢測燕麥孢囊線蟲和菲利普孢囊線蟲的特異引物序列、探針序列及其方法無效
| 申請號： | 201110408449.8 | 申請日： | 2011-12-09 |
| 公開（公告）號： | CN102605048A | 公開（公告）日： | 2012-07-25 |
| 發明（設計）人： | 李洪連;張煜;袁虹霞;孫炳劍;付博 | 申請（專利權）人： | 河南農業大學 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68;C12N15/11;G01N21/64 |
| 代理公司： | 鄭州中原專利事務所有限公司 41109 | 代理人： | 張紹琳 |
| 地址： | 450002*** | 國省代碼： | 河南;41 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 用于 同時 檢測 燕麥 孢囊 線蟲 菲利普 特異 引物 序列 探針 及其 方法 | ||
【權利要求書】：
1.用于同時檢測燕麥孢囊線蟲和菲利普孢囊線蟲的特異引物序列，其特征在于：
燕麥孢囊線蟲和菲利普孢囊線蟲的通用擴增引物序列為：
上游引物P1：5′-GCCGTGATGAGACGACGY-3′；
下游引物P2：5′-AGCCGAGTGATCCACCG-3′。
2.用于同時檢測燕麥孢囊線蟲和菲利普孢囊線蟲的探針序列，其特征在于：
燕麥孢囊線蟲的探針序列Probe?A為：
FAM-ATGCTTCTGCACGTGGCTTA-MGB，5′端標記報告熒光基團FAM，3′端標記TaqMan-MGB；
菲利普孢囊線蟲的探針序列Probe?F為：
JOE-TCCGTGCTCTGCTTATAGCA-MGB，5′端標記報告熒光基團JOE，3′端標記TaqMan-MGB。
3.如權利要求1或2所述的用于同時檢測燕麥孢囊線蟲和菲利普孢囊線蟲的方法，包括提取檢測燕麥孢囊線蟲和菲利普孢囊線蟲的DNA后，按如下實時熒光定量反應體系和反應條件對燕麥孢囊線蟲和菲利普孢囊線蟲進行檢測，其特征在于：所述實時熒光定量反應體系，在20μl體系中加入以下成份：
所述反應程序為：95℃預變性5min；進入循環，95℃變性15s；63℃退火1min，40個循環，檢測熒光信號得出擴增產物的熔解曲線。
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