[發(fā)明專利]一種鑒別煙草品種的SCAR標(biāo)記引物及其方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110408448.3
• 申請日: 2011-12-09
• 公開（公告）號: CN102605047A
• 公開（公告）日: 2012-07-25
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 馬林;王紹坤;常壽榮;羅華元;王超;饒智;羅昭標(biāo);董石飛;胡戰(zhàn)軍;林昆;毛華
• 申請（專利權(quán)）人: 鄭州輕工業(yè)學(xué)院
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 鄭州中原專利事務(wù)所有限公司 41109
• 代理人: 張紹琳

1.一種鑒別煙草品種的SCAR標(biāo)記引物，其特征在于：采用RAPD對12個煙草品種進(jìn)行分析，得到6條特異片段，基于6條特異片段核苷酸序列設(shè)計6對SCAR引物，所述12個煙草品種為紅花大金元、K326、NC102、NC297、云煙85、云煙87、云煙97、中煙100、翠碧1號、KRK26、龍江911和南江3號，所述6對SCAR引物分別為：

S1-F：GTCCACACGGGGCAATTAATG/

S1-R：GTCCACACGGCTATGAGATTA，PCR產(chǎn)物大小為545bp；

S2-F：CACGGCTGCGTGTTATGAAC/

S2-R：CACGGCTGCGAAGAGCTAAG，PCR產(chǎn)物大小為733bp；

S3-F：CAATCGCCGTAAATACACAAAGTA/

S3-R：AATCGCCGTCAGGAGAGAGA，PCR產(chǎn)物大小為887bp；

S4-F：CCACAGCAGTAACAGCAGGA/

S4-R：CCACAGCAGTCTGATATTGGATG，PCR產(chǎn)物大小為313bp；

S5-F：AGGCTGTGCTATTGTAGGATGAGAC/

S5-R：AGGCTGTGCTTACTGCTTCTAC，PCR產(chǎn)物大小為555bp；

S6-F：TTTGAGAATACGTCTTAACGACCA/

S6-R：CCACAGCAGTCCCTTCCTAA，PCR產(chǎn)物大小為1760bp。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的鑒別煙草品種的SCAR標(biāo)記方法，其特征在于：利用CTAB法提取12個煙草品種基因組DNA，采用6對引物分別對12個煙草品種基因組DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，通過6張SCAR圖譜的分析，建立12個煙草品種的分子ID，根據(jù)分子ID的不同，將12個煙草品種逐一鑒別，所述PCR擴(kuò)增20μL反應(yīng)體系為：50ng/μLDNA模板0.7μL，10×PCRBuffer?2μL，25mmol/L?MgCl₂?1.6μL，10mmol/L?dNTP?1μL，10μmol/L上下游引物各0.5μL，5U/μL?Taq?0.5μL，ddH₂O?14.2μL，所述12個煙草品種的分子ID為：紅花大金元：011001；K326：010001；NC102，011000；NC297，100100；云煙85，110101；云煙87，010101；云煙97，010110；中煙100，110011；翠碧1號，101011，KRK26，110111；龍江911，100010；南江3號，100101。