[發明專利]快速定量檢測蚊子組織中沃爾巴克氏體（Wolbachia）的引物及其試劑盒和方法

有效

• 申請號: 201110404916.X
• 申請日: 2011-12-07
• 公開（公告）號: CN102382898A
• 公開（公告）日: 2012-03-21
• 發明（設計）人: 奚志勇;朱儉
• 申請（專利權）人: 廣州沃巴克生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11;C12R1/01
• 代理公司: 廣州科粵專利商標代理有限公司 44001
• 代理人: 劉明星;莫瑤江

1.一種快速定量檢測蚊子體內組織中沃爾巴克氏體(Wolbachia)的Real-time?PCR引物，其特征在于，包括根據蚊子的看家基因設計的引物作為內參引物和根據沃爾巴克氏體(Wolbachia)的特異性基因設計的引物作為檢測引物。

2.根據權利要求1所述的Real-time?PCR引物，其特征在于，所述的蚊子的看家基因為核糖體S6蛋白(rpS6)基因，所述的沃爾巴克氏體(Wolbachia)的特異性基因為表面蛋白(WSP)基因。

3.根據權利要求2所述的Real-time?PCR引物，其特征在于，所述的根據核糖體S6蛋白(rpS6)基因設計的引物作為內參引物，當蚊子為埃及伊蚊時，其引物序列為：RPS6-RTF：CGTCGTCAGGAACGTATCCG和RPS6-RTR：TCTTGGCAGCCTTAGCAGC；或當蚊子為斯氏按蚊(Anopheles?stephensi)時，其引物序列為Asrps6-RTF：ACGACCACAAGCTGCGTCAC，Asrps6-RTR：GTCAGCACACCCTGCTTCATG；所述的根據沃爾巴克氏體(Wolbachia)的表面蛋白(WSP)基因設計的引物作為檢測引物，其引物序列為Wb-RTF：ACATTTGCTCCAACAACTG和Wb-RTR：AACTGCACTAGCTTCTG。

4.一種快速定量檢測蚊子體內組織中沃爾巴克氏體(Wolbachia)的Real-time?PCR試劑盒，包括內參引物、檢測引物和Real-time?PCR常規試劑，其特征在于，所述的內參引物是根據蚊子的看家基因設計的引物，所述的檢測引物是根據沃爾巴克氏體(Wolbachia)的特異性基因設計的引物。

5.根據權利要求4所述的Real-time?PCR試劑盒，其特征在于，所述的蚊子的看家基因為核糖體S6蛋白(rpS6)基因，所述的沃爾巴克氏體(Wolbachia)的特異性基因為沃爾巴克氏體(Wolbachia)的表面蛋白(WSP)基因。

6.根據權利要求5所述的Real-time?PCR試劑盒，其特征在于，所述的根據核糖體S6蛋白(rpS6)基因設計的引物作為內參引物，當蚊子為埃及伊蚊時，其引物序列為：RPS6-RTF：CGTCGTCAGGAACGTATCCG和RPS6-RTR：TCTTGGCAGCCTTAGCAGC，當蚊子為斯氏按蚊(Anopheles?stephensi)時，其引物序列為Asrps6-RTF：ACGACCACAAGCTGCGTCAC，Asrps6-RTR：GTCAGCACACCCTGCTTCATG；所述的根據沃爾巴克氏體(Wolbachia)的表面蛋白(WSP)基因設計的引物作為檢測引物，其引物序列為Wb-RTF：ACATTTGCTCCAACAACTG和Wb-RTR：AACTGCACTAGCTTCTG。

7.一種快速定量檢測蚊子體內組織中沃爾巴克氏體(Wolbachia)的方法，其特征在于，包括以下步驟：獲取蚊子的組織，提取組織中的DNA，以根據蚊子的看家基因設計的引物作為內參引物，根據沃爾巴克氏體(Wolbachia)的特異性基因設計的引物作為檢測引物，按照常規的Real-time?PCR方法對蚊子組織中的沃爾巴克氏體(Wolbachia)進行定性定量分析。

8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，所述的蚊子的看家基因為核糖體S6蛋白(rpS6)基因，所述的沃爾巴克氏體(Wolbachia)的特異性基因為沃爾巴克氏體(Wolbachia)的表面蛋白(WSP)基因。

9.根據權利要求8所述的方法，其特征在于，所述的根據核糖體S6蛋白(rpS6)基因設計的引物作為內參引物，當蚊子為埃及伊蚊時，其引物序列為：RPS6-RTF：CGTCGTCAGGAACGTATCCG和RPS6-RTR：TCTTGGCAGCCTTAGCAGC，當蚊子為斯氏按蚊(Anopheles?stephensi)時，其引物序列為Asrps6-RTF：ACGACCACAAGCTGCGTCAC，Asrps6-RTR：GTCAGCACACCCTGCTTCATG；所述的根據沃爾巴克氏體(Wolbachia)的表面蛋白(WSP)基因設計的引物作為檢測引物，其引物序列為Wb-RTF：ACATTTGCTCCAACAACTG和Wb-RTR：AACTGCACTAGCTTCTG。