[發明專利]銀杏活性成分萃取分離方法及萃取的活性物質在治療心腦血管疾病藥物中的應用

有效

• 申請號: 201110404145.4
• 申請日: 2011-12-01
• 公開（公告）號: CN102416027A
• 公開（公告）日: 2012-04-18
• 發明（設計）人: 孫紅;李保民;劉勇林;布會敏
• 申請（專利權）人: 徐州醫學院
• 主分類號: A61K36/16
• 分類號: A61K36/16;A61P9/00;A61K127/00
• 代理公司: 徐州市三聯專利事務所 32220
• 代理人: 周愛芳

技術領域

本發明涉及從植物中提取有效成分的方法，具體是從銀杏葉中提取有效活性成分黃酮類和萜內酯類化合物的方法，及利用有效提取物銀杏內酯研究其對機體血壓、心臟血流動力學及單個心肌細胞收縮力的影響，屬中藥技術制備領域。?

背景技術

心腦血管疾病是危害人類健康的主要疾病，其發病率和死亡率有逐年增加的趨勢，無論在我國還是西方發達國家，均已超過腫瘤而居于人類死因的首位。?

銀杏葉制劑的有效成份主要為黃酮及萜內酯類，簡稱銀杏葉提取物(GbE)，萜內酯化合物可以再分為銀杏內酯和白果內酯(Bilobalide)，銀杏內酯再分為A、B、C、J、M五種，白果內酯僅一種。銀杏酸是銀杏葉提取物毒性作用的因素，這些毒性作用包括胃腸道副作用、頭痛、皮膚刺激和水腫，已有多例在接觸銀杏葉或果實后出現過敏反應的報告。?

從技術先進性角度來看，銀杏葉制劑至今已經歷了大約五個發展階段，即第一代將銀杏葉烘干，粉碎原生藥壓片；第二代將銀杏葉用水提取后濃縮成膏，然后烘干、治粒壓片，但對其中的主要有效成分銀杏黃銅和銀杏內酯沒有進行控制；第三代在第二代的基礎上對主要有效成分銀杏黃酮和銀杏內酯進行定性控制，但無有害成分銀杏酸含量標示；第四代控制有效成分銀杏黃酮在44％以上，銀杏內酯在6％以上，有害成分銀杏酸控制在5ppm以下。中國藥有效成分銀杏黃酮在24％以上，銀杏內酯在6％以上，有害成分銀杏酸控制在10ppm以下；第五代控制典2010版要求銀杏葉提取物中含總黃酮醇苷不得少于24％，含總內酯不得少于6％，銀杏酸含量小于10ppm；美國藥典對此要求是總黃酮醇苷為22-27％，含總內酯為5.4-12％，銀杏酸含量小于10ppm；德國藥典對此要求是總黃酮醇苷為22-27％，含總內酯為5-7％，銀杏酸含量小于10ppm。由此可見，控制好總黃酮?醇苷、總內酯和銀杏酸的含量是銀杏葉提取物質量的關鍵因素。?

銀杏葉提取物主要藥理作用有：黃酮甙作為一種高效抗氧化物能清除自由基，抑制脂質過氧化；銀杏內酯可拮抗血小板因子引起的血小板聚集、微血栓的形成，還可改變血液流變學，降低血液粘度，改變微循環障礙；增加5-羥色胺的傳送，對腦部血液循環及腦細胞代謝有改善和促進作用；目前臨床上主要用于：1)防治冠心病、心絞痛、心肌梗死；2)防治腦血栓、腦血管痙攣，腦外傷后遺癥；3)改善老年人記憶力衰退和信息處理速度的降低問題；延緩早老性癡呆的發生；4)緩解眩暈、耳鳴和因血流減少所致的視力和聽力衰退。?

DE-A3338995和相關美國專利號4,571,407使用白果內脂，一種結構與銀杏內酯相關的倍半萜內酯治療腦病，腦水腫，脫鞘神經病和脊髓病，在中腦動脈閉合前使用白果內酯在梗塞部位，皮質和梗塞面積明顯減小。美國專利號5,264,216采用白果內酯能治療下列病菌的某些感染：陰道毛滴蟲、大腸桿菌、乳酸桿菌、卡氏肺囊蟲、金黃色葡萄球菌、類鏈球菌。銀杏葉提取物具有擴張冠狀動脈和腦血管作用，能夠改善微循環，促進心腦組織代謝，臨床上使用銀杏葉制劑治療心血管疾病已經多年，例如可以治療高血壓等心血管病，治療機制不是十分清楚。?

發明內容

本發明提供一種銀杏活性成分萃取分離方法，減少有毒有機溶劑的使用，提高有效成分得出率、各單體純度。?

本發明的技術方案如下：本發明從干銀杏葉中提取分離有效成分方法的步驟如下：

1)銀杏葉活性成分黃酮類和萜內酯類化合物的提取：銀杏干葉磨粉，用70％乙醇以7倍量微沸提取兩次，每次提取2小時，減壓回收乙醇，水沉，過DA101大孔樹脂柱，水洗，40％乙醇溶液以1BV/h的速度洗脫，收集洗脫液，減壓回收乙醇，干燥粉碎即得銀杏葉提取物。所得銀杏葉提取物總黃酮和總內酯含量分別在24％和6％以上。?

2)、去除銀杏酚酸：采用溶劑法或樹脂法；?

溶劑法：將步驟1)所得洗脫液，調節pH值為5，以石油醚為萃取劑萃取5?次，取水相，加一半體積95％乙醇減壓蒸餾，即得低酸銀杏葉提取物；?

樹脂法：銀杏葉提取物粉末50％乙醇溶解(乙醇的用量以剛好使得銀杏葉提取物全溶)，鹽酸調節pH為5，過AB-8柱70％乙醇洗脫，水沉10h取清液，濃縮干燥粉碎，得低酸銀杏葉提取物。?

3)、銀杏黃酮與內酯的粗分離：采用溶劑法或樹脂法；?

溶劑法粗分離黃酮與內酯方法是：取銀杏葉提取物，少量乙醇溶液溶解，緩慢加入有機溶劑正丁醇，過濾，取濾液，3％氨水溶液洗滌，濃縮回收有機相，酸化，減壓干燥得內酯；減壓蒸發弱堿洗滌液，鹽酸酸化，結晶，減壓干燥結晶，干燥結晶，得黃酮。?