[發明專利]一種艾納香總黃酮含量的測定方法

有效

• 申請號: 201110403659.8
• 申請日: 2011-12-07
• 公開（公告）號: CN102539363A
• 公開（公告）日: 2012-07-04
• 發明（設計）人: 譚道鵬;嚴啟新;康暉;曾偉珍;馮漢林
• 申請（專利權）人: 深圳海王藥業有限公司
• 主分類號: G01N21/33
• 分類號: G01N21/33;G01N1/38
• 代理公司: 深圳市百瑞專利商標事務所(普通合伙) 44240
• 代理人: 楊大慶

技術領域

本發明屬于中藥分析領域，涉及一種中藥材或提取物的質量控制方法，具體涉及一種含兩類黃酮的總黃酮含量測定方法，特別涉及一種測定艾納香類藥材或艾納香提取物或艾納香總黃酮成分相同的物質中總黃酮含量的方法。

背景技術

艾納香為菊科植物艾納香Blumea?balsamifera(L.)DC.干燥地上部分。中藥又稱大風艾。主產于廣西、貴州。據《廣西中藥材標準》(1990年版)記載，艾納香(大風艾)性“辛、苦、溫”，具“溫中活血、調經、祛風除濕”之功效。現代藥效學研究表明，艾納香中的黃酮類化合物具有抗氧化、抗癌、抗輻射和急性肝損傷保護等多種作用[段震，周英.艾納香化學成分及藥理研究進展[J].中華現代臨床醫學雜志，2006，4(21)：1941-1945.]。

黃酮是自然界中廣泛存在的一大類物質，包括黃酮、二氫黃酮、異黃酮、查耳酮等多種類型。很多植物所含有的黃酮并不是單一的某一類黃酮，如：黃芪同時含有黃酮和異黃酮兩類黃酮；麥冬同時含有黃烷酮和高異黃酮兩類黃酮等。因此，總黃酮的概念是指物質中所有不同類型的黃酮類化合物之和。艾納香中的黃酮類化學成分主要有兩種：二氫黃酮，如艾納香甲素(3，3’，5，7-四甲基-4’-甲氧基二氫黃酮)、艾納香素等；黃酮，如蘆丁、槲皮素等。兩類黃酮結構的主要區別在于：二氫黃酮中C-2和C-3之間為單鍵，而黃酮中C-2和C-3之間為雙鍵。由于兩類黃酮結構的差異導致其紫外吸收圖譜也完全不同。兩類黃酮的代表化合物艾納香甲素(3，3’，5，7-四甲基-4’-甲氧基二氫黃酮)和蘆丁的紫外掃描圖譜如附圖1。

目前，有很多關于中藥材或提取物中總黃酮含量測定的文獻報道，其中也包括艾納香[黃永林，趙志國，文永新.不同部位艾納香中總黃酮的含量測定[J].廣西植物，2006，26(4)：453-455.]及滇桂艾納香[姜建萍，杜秀，邱琴，藍仁青，李生茂，甄漢深.不同產地滇桂艾納香中總黃酮的含量測定[J].廣西中醫學院學報，2009，12(4)：44-46.]中總黃酮的含量測定方法。現有測定總黃酮含量的方法中多以蘆丁或其它黃酮類成分(如柚皮苷[李江平，萬云鵬，王建勇，曾文輝.總黃酮含量的測定方法[P].中國專利：03114240.0，2003-09-17.])為對照品，直接或通過加入鋁鹽顯色后在最大吸收波長測定吸光度的方法得以實現。文獻中，黃永林等[黃永林，趙志國，文永新.不同部位艾納香中總黃酮的含量測定[J].廣西植物，2006，26(4)：453-455.]測定艾納香中的總黃酮，姜建萍等[姜建萍，杜秀，邱琴，藍仁青，李生茂，甄漢深.不同產地滇桂艾納香中總黃酮的含量測定[J].廣西中醫學院學報，2009，12(4)：44-46.]測定滇桂艾納香總黃酮含量就是采用蘆丁作為對照品，加硝酸鋁、亞硝酸鈉、氫氧化鈉溶液顯色后測定的。但是顯色后測定總黃酮的方法步驟較為繁瑣，僅顯色反應就需30分鐘；穩定性也較差，如上述測定艾納香及滇桂艾納香總黃酮的兩篇文獻中最大吸收波長就不一致，一篇為500nm，另一篇為505nm。不顯色直接測定總黃酮的方法相對較為簡單，對于含有單一一類黃酮或以單一一類黃酮為主的藥材或提取物，這種測定方法是誤差也較小；但是，對于同時含有兩類黃酮的藥材或提取物(如艾納香)，由于在黃酮的最大吸收波長254nm，恰好是二氫黃酮紫外吸收的波谷，同樣在二氫黃酮的最大吸收波長289nm，又恰好是黃酮紫外吸收的波谷(如附圖1)，此時，采用一種黃酮最大吸收波長直接測定總黃酮所得結果將小于樣品實際含量，并且因受到另一類黃酮的干擾而使得測定結果產生很大的誤差。

發明內容

本發明的目的是提供一種準確、快捷測定艾納香或艾納香提取物或艾納香總黃酮相同的物質中總黃酮含量的方法。

本發明解決上述技術問題的技術方案是：

一種測定艾納香或艾納香提取物或艾納香總黃酮相同的物質中總黃酮含量的方法。該方法系用蘆丁或艾納香甲素(3，3’，5，7-四甲基-4’-甲氧基二氫黃酮)對照品配制成梯度標準溶液，艾納香藥材或艾納香提取物配制成供試品溶液，照紫外-可見分光光度法，直接測定梯度標準溶液吸光度，建立標準曲線；再測定供試品溶液吸光度，從標準曲線讀出供試品溶液濃度，最后根據配制溶液時的稀釋倍數計算出艾納香藥材或提取物的總黃酮含量，具體操作步驟如下：

(1)對照品溶液的制備：精密稱取一定量蘆丁或艾納香甲素(3，3’，5，7-四甲基-4’-甲氧基二氫黃酮)對照品，置容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，作為對照品標準母液；