[發明專利]一種梨果實內韌皮部同化物卸載路徑的熒光示蹤方法

有效

• 申請號: 201110402781.3
• 申請日: 2011-12-07
• 公開（公告）號: CN102495037A
• 公開（公告）日: 2012-06-13
• 發明（設計）人: 張紹鈴;張虎平;黃文江;秦改花;吳俊;陶書田;齊開杰
• 申請（專利權）人: 南京農業大學
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 南京天華專利代理有限責任公司 32218
• 代理人: 徐冬濤;李曉峰

1.一種梨果實內韌皮部同化物卸載路徑的熒光示蹤方法，其特征在于包括以下步驟：

(1)配制1～2mg/mL熒光染料CFDA溶液；

(2)步驟(1)配制的CFDA溶液的引入：輕輕磨擦果柄表皮，不要傷及木質部→迅速將棉花團纏繞在果柄上→用封口膜將棉花團封好→采用微量注射器將配制好的CFDA溶液緩慢注入棉花，每個果實注入150～250μl上述配制好的CFDA溶液→立即用封口膜密封針孔防止溶液外滲→然后用錫箔紙將果柄部位覆蓋好，防止CFDA見光分解；

(3)采樣：經CFDA溶液處理48～72h后采摘果實；

(4)制備切片：將新鮮的經CFDA溶液處理過的果實，切取帶有維管束的果肉組織塊，然后切片，每完成一個切片用載玻片直接沾取切片，使切片平鋪于載玻片的中央；

(5)觀察拍照：制備好的切片，立即用熒光顯微鏡觀察CF在果實內的分布圖像，防止熒光淬滅。

2.根據權利要求1所述的梨果實內韌皮部同化物卸載路徑的熒光示蹤方法，其特征在于配制1～2mg/mL熒光染料CFDA溶液的方法為：用體積比為1∶1的DMSO水溶液溶解CFDA，配成1～2mg/mL的CFDA溶液后避光備用。

3.根據權利要求1所述的梨果實內韌皮部同化物卸載路徑的熒光示蹤方法，其特征在于步驟(4)中所切取組織塊的大小為1cm×1cm×2cm；制備切片時，使用冰凍切片機進行連續切片，切片前用普通膠水冷固20～30min、冷固溫度為-20℃，切片厚度20μm；或者直接將果實的觀察部位進行徒手橫切或縱切，制備徒手切片。

4.根據權利要求1所述的梨果實內韌皮部同化物卸載路徑的熒光示蹤方法，其特征在于步驟(5)觀察時采用488nm激光激發，藍色濾光片檢測圖像，目鏡為2.5×，物鏡為10×。