[發(fā)明專利]一種甲型流感病毒甄別與耐藥檢測基因芯片的制備和用途

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110401595.8
• 申請日: 2011-12-06
• 公開（公告）號: CN102433391A
• 公開（公告）日: 2012-05-02
• 發(fā)明（設計）人: 王升啟;劉琪琦;陳蘇紅;張敏麗;劉志紅;朱坤
• 申請（專利權）人: 深圳市普瑞康生物技術有限公司;中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院放射與輻射醫(yī)學研究所
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種檢測甲型流感病毒核酸亞型和耐藥性的基因芯片，其制備方法包括：

1)步驟一：

制備3對通用引物，序列如表1所示：

表1引物序列

2)步驟二：

制備10條流感亞型核酸分型探針，序列如表2所示：

表2流感亞型核酸分型探針序列

制備6條耐藥檢測探針，序列如表3所示：

表3耐藥檢測探針序列

3)步驟三：

將步驟二中的各個寡核苷酸探針用6×SSC，0.1％SDS稀釋至終濃度50μM，并點到空白的醛基化修飾玻片上，陣列如表4所示，其中片基質控探針為20T序列，5’端cy3標記、3’端NH2修飾；陰性探針為與病毒無關的植物基因序列；通用序列為甲型流感病毒保守序列；引物1、2、3分別為引物NR21、NR22和NF5的反向互補序列，每條序列3’端NH₂修飾，所有探針的點樣量均為3nl，使用前至少在室溫放置干燥18小時；

表4寡核苷酸探針陣列

??片基質控??引物1??引物2??引物3??通用序列??陰性探針??陰性探針??片基質控??NEW-1??NEW-2??H1N1-1??H1N1-2??H3N2-1??H3N2-2??AIV-1??AIV-2??NEW-1??NEW-2??H1N1-1??H1N1-2??H3N2-1??H3N2-2??A1V-1??A1V-2??NEW-1??NEW-2??H1N1-1??H1N1-2??H3N2-1??H3N2-2??AIV-1??AIV-2??OSE-1??OSE-2??OSE-3??OSE-4??OSE-5??OSE-6??SIV-1??SIV-2??OSE-1??OSE-2??OSE-3??OSE-4??OSE-5??OSE-6??SIV-1??SIV-2??OSE-1??OSE-2??OSE-3??OSE-4??OSE-5??OSE-6??SIV-1??SIV-2??片基質控??陰性探針??陰性探針??通用序列??引物3??引物2??引物1??片基質控

4)步驟四：

制備RT-PCR體系，配方如表5所示：

表5R?TPCR體系配方

5)步驟五：

制備雜交液，其組成為4×SSC，0.3％SDS，5％甲酰胺，16μM?20T-NH₂；制備洗液A，其組成為1×SSC，0.2％SDS；制備洗液B，其組成為0.2×SSC；制備洗液C，其組成為0.1×SSC。

2.根據(jù)權利要求1所述的基因芯片，其特征還在于用于甲型流感病毒核酸分型和甲型流感病毒達菲耐藥性檢測。