[發明專利]一種甲型流感病毒甄別與耐藥檢測基因芯片的制備和用途

有效

• 申請號: 201110401595.8
• 申請日: 2011-12-06
• 公開（公告）號: CN102433391A
• 公開（公告）日: 2012-05-02
• 發明（設計）人: 王升啟;劉琪琦;陳蘇紅;張敏麗;劉志紅;朱坤
• 申請（專利權）人: 深圳市普瑞康生物技術有限公司;中國人民解放軍軍事醫學科學院放射與輻射醫學研究所
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68
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技術領域

本發明涉及甲型流感病毒甄別與耐藥檢測基因芯片的制備和用途，屬于基因芯片檢測技術領域。

背景技術

流感病毒(influenza?virus)在病毒分類學上屬正粘病毒科(Orthomyxoviridae)。它的基因組是分節段的單股負鏈RNA。根據病毒核蛋白(NP)和膜蛋白(MP)抗原特性及其基因特性不同，把流感病毒分為甲、乙、丙三型。甲型流感病毒根據其表面血凝素(HA)和神經氨酸酶(NA)蛋白結構及其基因特性又可分成許多亞型，至今甲型流感病毒已發現的血凝素有16個亞型(H1-16)，神經氨酸酶有9個亞型(N1-9)。由于基因組是分節段的，故易產生同型不同株間基因重配。尤其是人甲型流感病毒HA基因能經常不斷的發生點突變，導致其編碼的HA蛋白分子上氨基酸序列發生替換，造成其抗原性經常不斷的發生漂移，每次抗原性漂移常帶來不同程度的流感流行。

正確判斷流感病毒型別，是流行病學調查和疫情防控的重要環節。近100年來，已經出現了數次不同亞型的流感病毒全球大流行。1918年西班牙流感(H1N1型)，造成5000-6000萬人死亡；1957年亞洲流感(H2N2)，死亡至少200萬人；1968年香港流感(H3N2型)，死亡人數超過100萬；1997年香港禽流感(H5N1型)，死亡人數雖少于前幾次流感，但死亡率高達33％。甲型H1N1流感自2009年3月在墨西哥暴發以來，迅速在全球流行，成為國際性的公共衛生事件。世界衛生組織(WHO)于2009年6月11日將甲型H1N1流感病毒大流行的預警級別提升至最高的6級，全球共有超過214個國家和地區向WHO報告了經實驗室確診的甲型H1N1流感病例，至少18001人死亡。隨著全球人口流動性的不斷增加，流感病毒交替、混合流行將成為常態。

流感病毒耐藥性監測，是指導疫情防控和臨床用藥的必然要求。目前有兩類正式上市的藥物可用于治療流感，一類是神經氨酸酶抑制劑，包括磷酸奧司他韋(oseltamivir//達菲)和扎那米韋(zanamivir//樂感清)；另一類是M2通道阻滯劑，包括金剛烷胺(amantadine)和金剛乙胺(rimantadine)。病毒耐藥性的產生是抗病毒治療失敗的主要原因之一。由于流感病毒為節段型RNA病毒，突變發生率很高；隨著抗病毒治療的展開，藥物選擇壓力等因素導致病毒耐藥性不可避免地出現。據調查顯示，目前北美地區98％的季節性流感病毒H3N2對金剛烷胺耐藥，98％的季節性流感病毒H1N1對達菲耐藥；禽流感病毒H5N1對達菲耐藥的病例也屢有報道。自2009年6月丹麥報告了全球第一例甲型H1N1流感達菲耐藥病例后，截至2010年2月3日，全球已有20個國家報告了達菲耐藥的甲型H1N1流感病例至少225例。隨著達菲的廣泛使用，更多耐藥株的出現將不可避免。耐藥型病毒的產生和傳播可導致抗病毒治療失敗和民眾恐慌。盡管甲型H1N1流感病毒耐藥病例為數不多并呈散發狀，但仍引起了公眾和研究者的關注。因此，對甲型H1N1流感病毒耐藥性的監測和研究具有重要的意義。

甲型流感病毒具有多種高致病性亞型，而且各種亞型之間只是在蛋白或核酸水平具有細微差異，而臨床上存在甄別流感病毒各種亞型的需求。這種情況對準確甄別幾種重要的亞型提出了很高的技術和方法上的要求。針對不同的檢測對象，通常分為病毒核酸檢測和蛋白檢測，病毒核酸檢測因其靈敏度較高而被廣泛應用。