[發明專利]一種SPOP基因雜合性缺失的熔解曲線分析檢測試劑盒及其檢測方法和應用

無效

• 申請號: 201110398443.7
• 申請日: 2011-12-06
• 公開（公告）號: CN102399893A
• 公開（公告）日: 2012-04-04
• 發明（設計）人: 楊竹;于超;余秋波;黎剛;吳蘭香;李春莉
• 申請（專利權）人: 重慶醫科大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種SPOP基因雜合性缺失的高分辨率熔解曲線分析檢測試劑盒在卵巢癌檢測中的應用，其特征在于：該試劑盒由卵巢癌抑癌基因SPOP高分辨率熔解曲線分析的SPOP特異引物、LC480?HRM?master?mix、DNA提取試劑、陽性質控DNA、陰性質控DNA組成；

其中，高分辨率熔解曲線分析的SPOP特異引物由兩對引物片段組成，其中一對擴增SPOP高頻LOH區的序列，擴增片段長度為120bp；另一對引物擴增SPOP基因以外兩端的序列，片段長度為100bp，其序列如下表。

2.根據權利要求1所述的應用，其特征在于：所述試劑組成包括：

1對SPOP基因擴增引物；

1對SPOP基因外兩端擴增引物；

LC480?HRM?master?mix；

DNA提取試劑；

陽性質控DNA；

陰性質控DNA。

3.根據權利要求1所述的應用，其特征在于：所述LC480?HRM?master?mix帶有飽和熒光染料，激發波長440-470nm，發射熒光波長470-520nm。

4.根據權利要求1、2或3所述的應用，其特征在于：通過檢測SPOP基因的雜合性缺失的情況，輔助臨床診斷卵巢癌。

5.一種SPOP基因雜合性缺失的高分辨率熔解曲線分析檢測試劑盒，其特征在于：該試劑盒由卵巢癌抑癌基因SPOP高分辨率熔解曲線分析的SPOP特異引物、LC480?HRM?master?mix、DNA提取試劑和陽性質控DNA；陰性質控DNA組成；

其中，高分辨率熔解曲線分析的SPOP特異引物由兩對引物片段組成，其中一對擴增SPOP高頻LOH區的序列，擴增片段長度為120bp；另一對引物擴增SPOP基因以外兩端的序列，片段長度為100bp，其序列如下表。

6.根據權利要求5所述的試劑盒，其特征在于：所述試劑組成包括：

1對SPOP基因擴增引物；

1對SPOP基因外兩端擴增引物；

LC480?HRM?master?mix；

DNA提取試劑；

陽性質控DNA；

陰性質控DNA。

7.如權利要求5或6所述的檢測試劑盒的檢測方法，其特征在于：依次按下述步驟進行：

(1).按照DNA提取試劑即QIAamp?DNA?FFPE?Tissue?Kit操作說明提取組織DNA.

(2).配制總體積為10μl的PCR反應體系；

(3).反應條件：94℃預變性3min，94℃1min，59℃45S，72℃1min，30個循環，最后72℃延伸10min，在進行高分辨率熔解曲線分析之前，進行變性和復性處理：95℃30s，25℃2min，94℃30s，24℃3min，共2個循環；

(4).PCR反應完成后進行HRM分析，480熒光定量PCR儀從60℃開始，以0.05℃/s的斜率采集熔解曲線，到90℃結束，用480所配分析軟件對采集后的曲線進行分析；

(5).檢測曲線對比分析，獲得結果。

8.如權利要求7所述的方法，其中配制總體積為10μl的PCR反應體系為：

依次配制樣品PCR反應體系、陽性質控DNA?PCR反應體系、陰性質控DNA?PCR反應體系。