[發(fā)明專利]一種SPOP基因雜合性缺失的熔解曲線分析檢測(cè)試劑盒及其檢測(cè)方法和應(yīng)用無(wú)效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201110398443.7 | 申請(qǐng)日： | 2011-12-06 |
| 公開(kāi)（公告）號(hào)： | CN102399893A | 公開(kāi)（公告）日： | 2012-04-04 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 楊竹;于超;余秋波;黎剛;吳蘭香;李春莉 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 重慶醫(yī)科大學(xué) |
| 主分類(lèi)號(hào)： | C12Q1/68 | 分類(lèi)號(hào)： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 暫無(wú)信息 | 代理人： | 暫無(wú)信息 |
| 地址： | 400016*** | 國(guó)省代碼： | 重慶;85 |
| 權(quán)利要求書(shū)： | 查看更多 | 說(shuō)明書(shū)： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 spop 基因 雜合性 缺失 熔解 曲線 分析 檢測(cè) 試劑盒 及其 方法 應(yīng)用 | ||
1.一種SPOP基因雜合性缺失的高分辨率熔解曲線分析檢測(cè)試劑盒在卵巢癌檢測(cè)中的應(yīng)用，其特征在于：該試劑盒由卵巢癌抑癌基因SPOP高分辨率熔解曲線分析的SPOP特異引物、LC480?HRM?master?mix、DNA提取試劑、陽(yáng)性質(zhì)控DNA、陰性質(zhì)控DNA組成；
其中，高分辨率熔解曲線分析的SPOP特異引物由兩對(duì)引物片段組成，其中一對(duì)擴(kuò)增SPOP高頻LOH區(qū)的序列，擴(kuò)增片段長(zhǎng)度為120bp；另一對(duì)引物擴(kuò)增SPOP基因以外兩端的序列，片段長(zhǎng)度為100bp，其序列如下表。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于：所述試劑組成包括：
1對(duì)SPOP基因擴(kuò)增引物；
1對(duì)SPOP基因外兩端擴(kuò)增引物；
LC480?HRM?master?mix；
DNA提取試劑；
陽(yáng)性質(zhì)控DNA；
陰性質(zhì)控DNA。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于：所述LC480?HRM?master?mix帶有飽和熒光染料，激發(fā)波長(zhǎng)440-470nm，發(fā)射熒光波長(zhǎng)470-520nm。
4.根據(jù)權(quán)利要求1、2或3所述的應(yīng)用，其特征在于：通過(guò)檢測(cè)SPOP基因的雜合性缺失的情況，輔助臨床診斷卵巢癌。
5.一種SPOP基因雜合性缺失的高分辨率熔解曲線分析檢測(cè)試劑盒，其特征在于：該試劑盒由卵巢癌抑癌基因SPOP高分辨率熔解曲線分析的SPOP特異引物、LC480?HRM?master?mix、DNA提取試劑和陽(yáng)性質(zhì)控DNA；陰性質(zhì)控DNA組成；
其中，高分辨率熔解曲線分析的SPOP特異引物由兩對(duì)引物片段組成，其中一對(duì)擴(kuò)增SPOP高頻LOH區(qū)的序列，擴(kuò)增片段長(zhǎng)度為120bp；另一對(duì)引物擴(kuò)增SPOP基因以外兩端的序列，片段長(zhǎng)度為100bp，其序列如下表。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的試劑盒，其特征在于：所述試劑組成包括：
1對(duì)SPOP基因擴(kuò)增引物；
1對(duì)SPOP基因外兩端擴(kuò)增引物；
LC480?HRM?master?mix；
DNA提取試劑；
陽(yáng)性質(zhì)控DNA；
陰性質(zhì)控DNA。
7.如權(quán)利要求5或6所述的檢測(cè)試劑盒的檢測(cè)方法，其特征在于：依次按下述步驟進(jìn)行：
(1).按照DNA提取試劑即QIAamp?DNA?FFPE?Tissue?Kit操作說(shuō)明提取組織DNA.
(2).配制總體積為10μl的PCR反應(yīng)體系；
(3).反應(yīng)條件：94℃預(yù)變性3min，94℃1min，59℃45S，72℃1min，30個(gè)循環(huán)，最后72℃延伸10min，在進(jìn)行高分辨率熔解曲線分析之前，進(jìn)行變性和復(fù)性處理：95℃30s，25℃2min，94℃30s，24℃3min，共2個(gè)循環(huán)；
(4).PCR反應(yīng)完成后進(jìn)行HRM分析，480熒光定量PCR儀從60℃開(kāi)始，以0.05℃/s的斜率采集熔解曲線，到90℃結(jié)束，用480所配分析軟件對(duì)采集后的曲線進(jìn)行分析；
(5).檢測(cè)曲線對(duì)比分析，獲得結(jié)果。
8.如權(quán)利要求7所述的方法，其中配制總體積為10μl的PCR反應(yīng)體系為：
依次配制樣品PCR反應(yīng)體系、陽(yáng)性質(zhì)控DNA?PCR反應(yīng)體系、陰性質(zhì)控DNA?PCR反應(yīng)體系。
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