[發(fā)明專利]hSCARB2基因轉(zhuǎn)殖鼠的制造及其做為腸病毒感染動物模式的應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110397498.6
• 申請日: 2011-12-02
• 公開（公告）號: CN103081868A
• 公開（公告）日: 2013-05-08
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 周彥宏;莊再成;林怡玟
• 申請（專利權(quán)）人: 財團法人衛(wèi)生研究院
• 主分類號: A01K67/027
• 分類號: A01K67/027;A61D19/04;C12Q1/68
• 代理公司: 北京中博世達(dá)專利商標(biāo)代理有限公司 11274
• 代理人: 申健;王俊民

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明是關(guān)于腸病毒感染動物模式的制備，更特別地是關(guān)于SCARB2基因轉(zhuǎn)殖鼠的制造，以及其做為手足口病的動物模式上的應(yīng)用。

背景技術(shù)

腸病毒71型(EV71)已被證實會引起手足口病(HFMD)、皰疹性咽峽炎，和神經(jīng)系統(tǒng)的病變?nèi)鐭o菌性腦膜炎、腦炎及類小兒麻痹癥候群，甚至在嬰幼兒造成致死疾病，并且在全世界爆發(fā)嚴(yán)重的疫情(AbuBakar?et?al.，1999，Virus?Res?61(1)，1-9；Chang，Huang，and?Lin，1998，Lancet?352(9125)，367-8；Bible?et?al.，2007，Rev?Med?Virol?17(6)，371-9)。及至今日，透過公共衛(wèi)生對腸病毒71型疫情的控制與醫(yī)療照護仍顯不足。目前并沒有疫苗可供臨床適用。因此，研究腸病毒71型感染的機制，以供開發(fā)有效的治療藥物或預(yù)防性疫苗實屬重要。

現(xiàn)已知有多種動物模式被發(fā)展，欲應(yīng)用于研究EV71感染的致病原因(參見，例如Chen?et?al.，2004，J?Gen?Virol?85(Pt?1)，69-77；Nagata?et?al.，2004，J?Gen?Virol85(Pt?10)，2981-9；Ong?et?al.，2008，J?Neuropathol?Exp?Neurol?67(6)，532-42；Weng?et?al.，2010，Infect?12(7)，505-10)。而目前使用的腸病毒動物模式，是利用新生一天大的ICR小鼠，以EV71感染進(jìn)行人為發(fā)展而得，新生的ICR小鼠在EV71感染后會出現(xiàn)后肢麻痹，并且最后在受感染2周內(nèi)死亡(Wu?et?al.，2001，Vaccine20(5-6)，895-904)。然而，由于該ICR小鼠僅適用于，評估小鼠對于腸病毒感染或疫苗引起的免疫反應(yīng)，無法真正模擬在人類受到感染后所引發(fā)的免疫反應(yīng)。同時，由于該小鼠模式并未呈現(xiàn)腸病毒感染后的HFMD癥狀，故利用其所進(jìn)行的研究觀察只局限于，腸病毒感染后小鼠的存活率及神經(jīng)性毒性，無法確實應(yīng)用在評估藥物或疫苗，對于腸病毒感染的治療及/或預(yù)防功效。此外，目前使用的ICR小鼠因為免疫系統(tǒng)發(fā)育不全，可能無法充分反應(yīng)腸病毒EV71的毒性，及了解其對于神經(jīng)系統(tǒng)的影響。

再者，目前使用的ICR小鼠是利用小鼠適應(yīng)過的腸病毒株(mouse-adaptedEV71?strain，參見Wang?et?al.，2004，J?Virol?78(15)，7916-24)進(jìn)行感染試驗，但由于該病毒并沒有存在于自然界，故無法使受感染的ICR小鼠表現(xiàn)出真正的，天然流行腸病毒株感染后應(yīng)有的HFMD癥狀及神經(jīng)性毒性(Perez-Velez?et?al.，2007，Clin?Infect?Dis?45(8)，950-7)。且經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，以自然界流行的腸病毒株感染已知的成年ICR、Balb/c、CH3、C57BL/6等實驗用小鼠(這些皆不表現(xiàn)EV71接受體)后，都完全不會引起HFMD癥狀及神經(jīng)性毒性(Wang，2004，如前述；Chen?et?al.，2004，J?Gen?Virol?85(Pt?1)，69-77)。

近來研究發(fā)現(xiàn)，人類清道夫接受體B類，膜蛋白質(zhì)2型(human?scavenger?receptor?class?B，member?2；hSCARB2)是腸病毒71型及克沙其病毒16型(Coxsackie?A16)進(jìn)入細(xì)胞的接受器(Yamayoshi?et?al.Nat?Med?15(7)：798-801，2009)，雖然小鼠SCARB2與人類SCARB2(hSCARB2)具有85.8％同源性，但顯示其不作為EV71的受體。本發(fā)明遂建立hSCARB2基因轉(zhuǎn)殖鼠作為腸病毒實驗動物感染模式，以期仿真腸病毒的感染途徑，研究其引起手足口病和神經(jīng)系統(tǒng)病變的致病機轉(zhuǎn)，并藉以評估腸病毒疫苗在此動物模式中的免疫保護效力，以及候選治療性藥物或疫苗對于腸病毒感染的防治功效，以增進(jìn)對腸病毒感染致病機制的了解，以及應(yīng)用于有效腸病毒疫苗的研發(fā)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明是基于發(fā)現(xiàn)，人類清道夫接受體B類，膜蛋白質(zhì)2型(以下簡稱SCARB2)為腸病毒進(jìn)入細(xì)胞的接受器，遂建立SCARB2基因轉(zhuǎn)殖鼠作為腸病毒71型實驗動物感染模式，應(yīng)用于研究EV71引起的神經(jīng)系統(tǒng)病變機轉(zhuǎn)，及分析EV71疫苗的保護作用，以開發(fā)有效的治療藥物或是預(yù)防腸病毒感染相關(guān)疾病的疫苗。