[發明專利]一種提取擴增單克隆間充質干細胞的方法及所用培養液

無效

• 申請號: 201110396705.6
• 申請日: 2011-12-02
• 公開（公告）號: CN102433301A
• 公開（公告）日: 2012-05-02
• 發明（設計）人: 金宜強;楊立敏;鄭佳威
• 申請（專利權）人: 上海安集協康生物技術有限公司
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種提取擴增單克隆間充質干細胞的方法，依次包括以下步驟：

(1)單個核細胞接種：

從供體組織中分離出單個核細胞，根據培養容器的底部表面積，以0.5～5×10^6細胞/cm²的密度接種于間充質干細胞無血清培養液，進行培養；

(2)挑選單克?。?/p>

培養到接種后3周，選取貼壁生長的由100-150個梭形細胞組成的旋渦狀單克隆細胞群落(圖1)，將其挑下并接種于含有無血清培養液的培養容器中，進行培養；

(3)細胞鑒定：

當一個單克隆培養的細胞總數達5×10^6個細胞以上時，鑒定其是否符合間充質干細胞特征，不符合的廢棄，符合的繼續培養擴增或用于其他用途；

通過以上步驟獲得高純度的單克隆間充質干細胞。

2.權利要求1所述的一種提取擴增單克隆間充質干細胞的方法，所述的供體組織是胎盤小葉。

3.權利要求1-2所述的一種提取擴增單克隆間充質干細胞的方法，所述的無血清培養液是由DMEM-LG(Low?Glucose，低糖)培養液和F12培養液以1∶1體積比混合而成，并添加1×B27添加液、0.001～0.01umol/ml維生素C、0.5～5ug/ml纖粘連蛋白(Fibronectin)、1～20ng/ml?bFGF(basic?Fibroblast?Growth?Factor，堿性成纖維細胞生長因子)、1～20ng/ml?LIF(Leukemia?Inhibitory?Factor，白血病抑制因子)。

4.權利要求3所述的一種提取擴增單克隆間充質干細胞的方法，所述的無血清培養液由DMEM-LG培養液和F12培養液以1∶1體積比混合而成，并添加1×B27添加液、0.004umol/ml維生素C、1ug/ml纖粘連蛋白、10ng/ml?bFGF、10ng/mlLIF。

5.一種間充質干細胞無血清培養液，由DMEM-LG培養液和F12培養液以1∶1體積比混合而成，并添加1×B27添加液、0.001～0.01umol/ml維生素C、0.5～5ug/ml纖粘連蛋白、1～20ng/ml?bFGF、1～20ng/ml?LIF。

6.權利要求5所述的一種間充質干細胞無血清培養液，由DMEM-LG培養液和F12培養液以1∶1體積比混合而成，并添加1×B27添加液、0.004umol/ml維生素C、1ug/ml纖粘連蛋白、10ng/ml?bFGF、10ng/ml?LIF。