[發(fā)明專利]一種重組型核酸建構(gòu)物及使用重組型核酸建構(gòu)物快速回收胺基酸組成物的方法有效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201110395072.7 | 申請(qǐng)日： | 2011-12-02 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN103031326A | 公開（公告）日： | 2013-04-10 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 趙云鵬;張智翔;姜中人 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 逢甲大學(xué) |
| 主分類號(hào)： | C12N15/70 | 分類號(hào)： | C12N15/70;C12R1/19 |
| 代理公司： | 北京中博世達(dá)專利商標(biāo)代理有限公司 11274 | 代理人： | 申健;王俊民 |
| 地址： | 中國臺(tái)灣臺(tái)*** | 國省代碼： | 中國臺(tái)灣;71 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 重組 核酸 建構(gòu) 使用 快速 回收 胺基 組成 方法 | ||
1.一種使用重組型核酸建構(gòu)物快速回收胺基酸組成物的方法，其特征在于，包含下列步驟：
(a)構(gòu)筑一第一核酸建構(gòu)物，該第一核酸建構(gòu)物包括一第一核酸序列及一第二核酸序列，其中該第一核酸序列包含有噬菌體φX174溶菌基因E，該第二核酸序列包含有噬菌體溶酶素基因；
(b)構(gòu)筑一質(zhì)體含有一第二核酸建構(gòu)物，其中該第二核酸建構(gòu)物進(jìn)一步包括一熱敏感性抑制蛋白CI857基因的核酸序列，一λPRPL啟動(dòng)子的核酸序列，一熱休克蛋白groEL啟動(dòng)子的核酸序列，及一lacO控制子位置的核酸序列；
(c)將該第一核酸建構(gòu)物植入該質(zhì)體中，形成一重組型核酸建構(gòu)物；
(d)將步驟(c)所形成的該重組型核酸建構(gòu)物轉(zhuǎn)形至一個(gè)宿主細(xì)菌，得到一重組型菌株；
(e)將該重組型菌株，培養(yǎng)于培養(yǎng)基中，經(jīng)一溫度誘導(dǎo)作用后，以使該第一核酸建構(gòu)物表現(xiàn)，使細(xì)菌破裂而釋出細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)；
(f)收獲步驟(e)的該重組型菌株釋出至培養(yǎng)基中的物質(zhì)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的使用重組型核酸建構(gòu)物快速回收胺基酸組成物的方法，其特征在于，步驟(a)所述的噬菌體溶酶素基因，可為T4噬菌體溶酶素基因、T7噬菌體溶酶素基因。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的使用重組型核酸建構(gòu)物快速回收胺基酸組成物的方法，其特征在于，步驟(f)收獲的該物質(zhì)包括一重組型蛋白質(zhì)、一不可溶內(nèi)含體(inclusion)、一滯留胞內(nèi)的物質(zhì)、及其組合。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的使用重組型核酸建構(gòu)物快速回收胺基酸組成物的方法，其特征在于，該重組型蛋白質(zhì)包括蛋白質(zhì)、酵素、抗體、勝肽、胺基酸、及其組合。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的使用重組型核酸建構(gòu)物快速回收胺基酸組成物的方法，其特征在于，該重組型蛋白質(zhì)為重組型酵素。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的使用重組型核酸建構(gòu)物快速回收胺基酸組成物的方法，其特征在于，該溫度誘導(dǎo)作用包含將培養(yǎng)溫度由原培養(yǎng)溫度提升至攝氏38至42度之間，維持至少三十分鐘，再將培養(yǎng)溫度降至原培養(yǎng)溫度。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的使用重組型核酸建構(gòu)物快速回收胺基酸組成物的方法，其特征在于，原培養(yǎng)溫度為攝氏37度。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的使用重組型核酸建構(gòu)物快速回收胺基酸組成物的方法，其特征在于，該步驟(f)所述收獲該些重組型菌株釋出至培養(yǎng)基中的物質(zhì)，進(jìn)一步包括步驟：
(1)將含有一特定基因產(chǎn)物的基因序列的核酸建構(gòu)物植入步驟該重組型菌株中；以及
(2)將步驟(1)的該重組型菌株培養(yǎng)于培養(yǎng)基中，在該重組型菌株產(chǎn)生該特定基因產(chǎn)物后，再經(jīng)一溫度誘導(dǎo)作用以使該第一核酸建構(gòu)物表現(xiàn)，使細(xì)菌破裂而釋出細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)，接著收獲培養(yǎng)基中的該特定基因產(chǎn)物。
9.一種重組型核酸建構(gòu)物，其特征在于，包含：
一噬菌體φX174溶菌基因E的核酸序列；
一噬菌體T7溶酶素基因的核酸序列；
一熱敏感性抑制蛋白(heat-sensitive?repressor?protein)CI857基因的核酸序列；
一λPRPL啟動(dòng)子的核酸序列；
一熱休克蛋白(heat?shock?protein)groEL啟動(dòng)子的核酸序列；以及
一lacO控制子位置的核酸序列。
10.一種重組型核酸建構(gòu)物，其特征在于，包含：
一噬菌體φX174溶菌基因E的核酸序列；
一噬菌體T4溶酶素基因的核酸序列；
一熱敏感性抑制蛋白(heat-sensitive?repressor?protein)CI857基因的核酸序列；
一λPRPL啟動(dòng)子的核酸序列；
一熱休克蛋白(heat?shock?protein)groEL啟動(dòng)子的核酸序列；以及
一lacO控制子位置的核酸序列。
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