[發明專利]一種用于新生兒葡萄糖六磷酸脫氫酶缺乏癥篩查的試劑盒及其制備方法

有效

• 申請號: 201110394189.3
• 申請日: 2011-12-02
• 公開（公告）號: CN102519925A
• 公開（公告）日: 2012-06-27
• 發明（設計）人: 吳道貧;馮健明;汪勤;沈健;何海榮;孫勇;趙可輝;王云愛
• 申請（專利權）人: 廣州市豐華生物工程有限公司
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64;G01N33/52
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 陳衛

1.一種用于新生兒葡萄糖六磷酸脫氫酶缺乏癥篩查的試劑盒，其特征在于包括如下組分：

（1）16ml/瓶的G6P底物試劑干粉；

（2）16ml/瓶的6PG底物試劑干粉；

（3）35ml/瓶的銅試劑：用硫酸銅、酒石酸鉀鈉及碳酸鈉制成；

（4）G6PD濾紙干血片質控品，C1?陽性，C2?陰性；

（5）35ml/瓶的底物復溶試劑：用MgCl₂、雙甘氨酸及Tris-Hcl制成；

（6）微孔白色反應板。

2.權利要求1所述用于新生兒葡萄糖六磷酸脫氫酶缺乏癥篩查的試劑盒的制備方法，其特征在于包括如下步驟：

（1）制備G6P和6PG兩種底物試劑干粉、底物復溶試劑、銅試劑；

（2）制備濾紙干血片質控品；

（3）分裝上述底物試劑干粉、底物復溶試劑、銅試劑；

（4）貼標簽；

（5）組裝為成品試劑盒；

步驟（1）中，G6P底物試劑的制備是將1.2g的G6P加純化水，充分攪拌溶解，待完全溶解后，加入1.6?g?的NADP·Na₂，補足純化水至100ml，混勻；6PG底物試劑的制備是將1.5?g的6PG加純化水，充分攪拌溶解，待完全溶解后，加入1.6?g?的NADP·Na₂，補足純化水至100ml，混勻；底物復溶試劑的制備是將0.2?g?Tris和?5.4?g?NaCl加純化水，充分攪拌溶解，待完全溶解后，加入1.8?g?MgCl₂和2.5?g?雙甘氨酸，補足純化水至100ml，混勻；銅試劑溶液的制備是分別將0.03gCuSO₄·5H₂O、0.05gNa₂CO_3?和0.03g酒石酸鉀鈉加入到裝有純化水的容器中，待完全溶解后，補足純化水至100ml，混勻；

步驟（2）中，所述濾紙干血片質控品的制備方法如下：將枸櫞酸抗凝綿羊全血用低速離心機3000rmp，離心?10~15min分離出血漿和紅細胞。

3.按紅細胞∶血漿=1.1∶1.0調整紅細胞壓積；分別加入G6PD和6PGD純品原料，使C1全血中G6PD/6PGD＜1.0，C2全血中G6PD/6PGD＞1.0；將C1、C2分別放在磁力攪拌器上不斷攪拌，充分混勻；將裁好的?903#濾紙懸掛在架子上，用移液器將質控品滴加到濾紙片上。

4.取液量為50ul/血斑，對準中心滴下，室溫陰干3~4小時，不可重疊擺放，陰干后裝入貯存袋，袋內放干燥劑，放入2~8℃冰箱保存備用；

步驟（3）中將步驟（2）中配制好的G6P底物試劑、6GP底物試劑、底物復溶試劑、銅試劑進行分裝，將分裝好的G6P底物試劑、6GP底物試劑利用凍干機制成凍干粉。

5.權利要求1所述用于新生兒葡萄糖六磷酸脫氫酶缺乏癥篩查的試劑盒的使用方法，其特征在于包括如下步驟：

（1）試劑準備：G6P底物試劑干粉，6PG底物試劑干粉分別加16ml底物復溶試劑，混勻，靜置20分鐘；?

（2）檢驗操作：

（a）加樣：用打孔鉗從樣品濾紙干血片中打下下直徑為?3mm或1/8?英寸的樣本兩份，打下紙片須被血液浸透，并依次分別加入G6PD和6PGD測試的空白微孔中，每孔一片，一一對應；

（b）加入底物：向檢測G6PD熒光值的微孔中加入復溶好的G6P底物試劑150μl；向檢測6PGD熒光值的微孔中加入復溶好的6PG底物試劑150μl并加貼封片；

（c）孵育：在室溫下，緩慢振蕩30分鐘；

（d）加入銅試劑：孵育完成后，立即加入150μl/孔冷的銅試劑工作液，混勻；

（e）檢測：使用對應的程序進行檢測，檢測工作在15分鐘內完成，激發波長355nm，?發射波長460nm；

（f）結果分析：將檢測得到的G6PD的熒光值（S1）與6PGD的熒光值（S2），計算S1/S2的值，當S1/S2≤1.0時，結果判斷為陽性，當S1/S2＞1.0時，結果判斷為陰性。

6.權利要求1所述用于新生兒葡萄糖六磷酸脫氫酶缺乏癥篩查的試劑盒的結果判斷方法，其特征在于包括如下步驟：

（1）檢測：將加完銅試劑的微孔反應板使用對應的程序進行檢測，檢測工作在15分鐘內完成，激發波長355nm，發射波長460nm；

（2）結果分析：將檢測得到的G6PD的熒光值（S1）與6PGD的熒光值（S2），計算S1/S2的值，當S1/S2≤1.0時，結果判斷為陽性，當S1/S2＞1.0時，結果判斷為陰性。