[發明專利]高效表達HIF-1α基因的腸癌細胞株無效
| 申請號： | 201110392673.2 | 申請日： | 2011-12-01 |
| 公開（公告）號： | CN103131672A | 公開（公告）日： | 2013-06-05 |
| 發明（設計）人： | 周利紅;李琦;范忠澤;王炎;殷佩浩;慈書俊;周寧;劉宣;隋華 | 申請（專利權）人： | 上海市普陀區中心醫院 |
| 主分類號： | C12N5/10 | 分類號： | C12N5/10;C12N15/867;C12N15/66;C12R1/91 |
| 代理公司： | 上海新天專利代理有限公司 31213 | 代理人： | 王敏杰 |
| 地址： | 200062 *** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 高效 表達 hif 基因 腸癌 細胞株 | ||
1.一種高效表達HIF-1α的人腸癌細胞株，其特征在于，所述細胞株保藏號為CGMCC?NO.5261。
2.一種構建包裝慢病毒載體的方法，其特征在于，步驟包括：
步驟1，獲取目的基因編碼序列，將目的基因與慢病毒表達載體分別進行酶切；其中，所述目的基因為HIF-1α基因、或該基因天然發生或人工發生的等位基因變異體；所述慢病毒表達載體包含HIV基本元件、以及與HIF-1α基因可操作地連接的調節序列；
步驟2，將所述目的基因編碼序列的酶切產物與慢病毒表達載體進行定向克隆連接，構建得到慢病毒載體重組質粒；
步驟3，提供慢病毒包裝系統，與所述重組質粒共轉染293T細胞，獲得慢病毒載體。
3.一種如權利要求2所述方法制備的慢病毒載體。
4.一種如權利要求1所述的高效表達HIF-1α的人腸癌細胞株的制備方法，其特征在于，步驟包括：
步驟1，獲取目的基因編碼序列，將目的基因與慢病毒表達載體分別進行酶切；其中，所述目的基因為HIF-1α基因、或該基因天然發生或人工發生的等位基因變異體；所述慢病毒表達載體包含HIV基本元件、以及與HIF-1α基因可操作地連接的調節序列；
步驟2，將所述目的基因編碼序列的酶切產物與慢病毒表達載體進行定向克隆連接，構建得到慢病毒載體重組質粒；
步驟3，提供慢病毒包裝系統，與所述重組質粒共轉染293T細胞，獲得慢病毒載體；
步驟4，慢病毒載體感染腸癌細胞。
5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述腸癌細胞選自人結腸癌細胞、結腸腺癌細胞、直腸癌細胞、直腸腺癌細胞、結直腸癌細胞。
6.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述慢病毒表達載體選自pGC-FU載體、或pGC-LV載體。
7.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述慢病毒包裝系統包括包裝質粒、包膜蛋白質粒。
8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，所述包裝質粒含有HIV病毒的gag基因、pol基因和rev基因。
9.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，所述包膜蛋白質粒中含有單純皰疹病毒來源的VSV-G基因。
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