[發(fā)明專利]一種用于基因靶向傳遞的siRNA載體復(fù)合物及其制備方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110392143.8
• 申請日: 2011-12-01
• 公開（公告）號: CN102552936A
• 公開（公告）日: 2012-07-11
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 程國勝;張蓓蓓;于昊;宋琴
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院蘇州納米技術(shù)與納米仿生研究所
• 主分類號: A61K48/00
• 分類號: A61K48/00;A61P35/00
• 代理公司: 南京蘇科專利代理有限責(zé)任公司 32102
• 代理人: 陳忠輝

1.一種用于基因靶向傳遞的siRNA載體復(fù)合物，其特征在于，所述siRNA載體復(fù)合物為由磁小體、非病毒載體和目的siRNA組成的復(fù)合體系，其中所述目的siRNA為與疾病或癌癥相關(guān)的、人工合成的siRNA。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于基因靶向傳遞的siRNA載體復(fù)合物，其特征在于，所述磁小體為制取自趨磁細(xì)菌或現(xiàn)購的磁螺菌屬模式菌株AMB-1、格瑞菲斯瓦爾德磁螺菌MSR-1之一的鏈狀顆粒，其中所述趨磁細(xì)菌為從太湖水體淤泥中經(jīng)富集和篩選得到。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種用于基因靶向傳遞的siRNA載體復(fù)合物，其特征在于，所述磁小體的粒徑大小為30～60納米。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于基因靶向傳遞的siRNA載體復(fù)合物，其特征在于，所述目的siRNA的長度為20-23個核苷酸。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于基因靶向傳遞的siRNA載體復(fù)合物，其特征在于，所述非病毒載體為聚乙烯亞胺、樹狀大分子、殼聚糖及其衍生物、和陽離子脂質(zhì)體中的一種或一種以上，帶正電的非病毒載體與目的siRNA的磷酸骨架及帶負(fù)電的細(xì)胞膜表面相結(jié)合。

6.一種制備權(quán)利要求1所述的siRNA載體復(fù)合物的方法，其特征在于包括步驟：

Ⅰ、提純制備磁小體，并對純凈的磁小體進行γ射線照射滅菌，測定OD₆₆₀，定量制成備用物；

Ⅱ、設(shè)計并合成與疾病相關(guān)的目的siRNA，在緩沖液中稀釋保存，定量備用；

Ⅲ、選取一種或一種以上非病毒載體制成溶液，按非病毒載體中氨基N與目的siRNA中磷酸基P的適當(dāng)比例混合，在一定溫度和pH值條件下靜置或振蕩，使目的siRNA和非病毒載體通過靜電或共價結(jié)合制成初級復(fù)合物；

Ⅳ、將步驟Ⅰ的備用物與步驟Ⅲ制得的初級復(fù)合物混合，在一定溫度和pH值條件下，通過靜電或共價結(jié)合，制得siRNA載體復(fù)合物。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種用于基因靶向傳遞的siRNA載體復(fù)合物的制備方法，其特征在于，步驟Ⅰ中所述的提純制備磁小體的方法為：采用超聲波破碎法或細(xì)胞壓榨機法破碎菌體并離心沉淀，用磁鐵吸附磁小體后再用磷酸緩沖液沖洗干凈。

8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種用于基因靶向傳遞的siRNA載體復(fù)合物的制備方法，其特征在于，步驟Ⅰ中所述的測定OD₆₆₀的方法為吸光度法。

9.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種用于基因靶向傳遞的siRNA載體復(fù)合物的制備方法，其特征在于，步驟Ⅳ中備用物與初級復(fù)合物按其中磁小體與目的siRNA質(zhì)量比為1:5～1:1混合。