[發(fā)明專利]通用熒光標記探針的PCR-LDR基因多態(tài)性測序方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110391898.6
• 申請日: 2011-11-30
• 公開（公告）號: CN102409101A
• 公開（公告）日: 2012-04-11
• 發(fā)明（設計）人: 陸炯;陳軼群;肖君華
• 申請（專利權）人: 上海翼和應用生物技術有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11;G01N21/64
• 代理公司: 上海泰能知識產權代理事務所 31233
• 代理人: 黃志達;謝文凱

1.一組用于基因多態(tài)性測序的核酸序列包括：

a)至少一條LDR標記探針，包括三部分，第一部分位于5’端且和待測模板嚴謹配對，第二部分位于3’端且和通用模板5’序列嚴謹配對，第三部分位于上述兩部分序列中間，是一段用于調整探針長度的、和待測模板或通用模板或其他探針序列均無同源性的隨機序列，該探針的5’磷酸化；

b)2到4條LDR檢測探針，每條包括兩部分，一部分位于3’端且和待測模板嚴謹配對，另一部分位于5’端是一段用于調整探針長度的、和待測模板或通用模板或其他探針序列均無同源性的隨機序列，且該2到4條檢測探針通過設計長度不同的隨機序列使檢測位點上不同的2到4種堿基對應不同的LDR產物長度；

c)至少一條通用熒光標記探針，該探針的5’端磷酸化，3’端用熒光標記并且和通用模板d)的5’端序列嚴謹配對；

d)至少一條通用模板，其5’端序列和所述通用熒光標記探針c)嚴謹配對，其3’端序列和所述LDR標記探針a)嚴謹配對。

2.根據權利要求1所述的一組用于基因多態(tài)性測序的核酸序列，其特征在于，所述的待測模板為待測序的多態(tài)性序列經PCR擴增后的產物。

3.根據權利要求1所述的一組用于基因多態(tài)性測序的核酸序列，其特征在于，所述的LDR標記探針a)和LDR檢測探針b)與待測模板嚴謹配對部分的長度范圍均為10-25個核苷酸。

4.根據權利要求1-3所述的一組用于基因多態(tài)性測序的核酸序列，其特征在于，所述的核酸序列a)-d)中的只是一種為DNA。

5.根據權利要求4所述的一組用于基因多態(tài)性測序的核酸序列，其特征在于，所述的核酸序列a)-d)均為DNA。

6.一種基因多態(tài)性測序方法，包括如下步驟：

(1)提供權利要求1所述的一組核酸序列；

(2)LDR反應，獲得熒光標記的2到4條長度不同的LDR產物，對應檢測位點上2到4種不同的堿基；

(3)通過熒光標記檢測長度不同的LDR產物。

7.根據權利要求6所述的基因多態(tài)性測序方法，其特征在于，在所述的LDR反應之前有一個PCR反應以擴增待測序的多態(tài)性序列，且PCR引物與所述的核酸序列a)-d)均無同源性。

8.一種基因多態(tài)性測序試劑盒，包括含權利要求1所述的一組核酸序的LDR反應試劑。

9.一種基因多態(tài)性測序試劑盒，包括PCR反應試劑、和含權利要求1所述的一組核酸序的LDR反應試劑。

10.一種基因多態(tài)性測序試劑盒，包括核酸提取試劑、PCR反應試劑、和含權利要求1所述的一組核酸序的LDR反應試劑。