[發明專利]一種防止拜氏梭菌菌株退化的方法無效
| 申請號： | 201110389426.7 | 申請日： | 2011-11-30 |
| 公開（公告）號： | CN102517229A | 公開（公告）日： | 2012-06-27 |
| 發明（設計）人： | 韓蓓;撒迪厄斯伊則吉;張瑞娟 | 申請（專利權）人： | 西安交通大學 |
| 主分類號： | C12N1/20 | 分類號： | C12N1/20;C12R1/145 |
| 代理公司： | 西安通大專利代理有限責任公司 61200 | 代理人： | 陸萬壽 |
| 地址： | 710049 *** | 國省代碼： | 陜西;61 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 防止 拜氏梭菌 菌株 退化 方法 | ||
1.一種防止拜氏梭菌菌株退化的方法，其特征在于，按照如下步驟：
(1)構建退化菌株模型；
(2)恢復退化菌株產丁醇代謝。
2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(1)構建退化菌株模型的是指：
C.beijerinckii?NCIMB8052野生菌株芽孢懸浮液150μl于75℃熱激10min，然后接種至10ml?TGY液體培養基，其中TGY液體培養基包括3％胰蛋白胨，2％葡萄糖，1％酵母粉，0.1％半胱氨酸，厭氧培養箱內30℃培養過夜；10％的培養物轉接量進行連續轉接，每6h一次，轉接至10ml的新鮮TGY液體培養基中，共計轉接50次，獲得退化菌株，命名為DG150；保存DG150的培養物，采用25％甘油保存法，-80℃；6％的轉接量轉接DG150培養物至P2發酵培養基，其中P2發酵培養基60g/L葡萄糖，1g/L酵母粉，1％buffer，1％Vitamin，1％Mineral，厭氧培養箱內30℃進行發酵，每隔12h取樣、共計發酵72h，使用分光光度計測定細菌的OD600，同時樣品離心取上清進行丁醇、丙酮、乙醇、乙酸、丁酸的GC分析。
3.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(2)恢復退化菌株產丁醇代謝是指：
2g/L?CaCO3，(NH4)2CO3，NH4HCO3，K2CO3，NaHCO3，Na2CO3加入至P2發酵培養基，6％轉接量轉接DG150培養物至P2培養基，連續培養72h，每隔12小時取樣，細菌OD600的測定、樣品前處理和分析方法同步驟(1)；
恢復退化菌株產丁醇代謝的添加物CaCO3的使用濃度確定：
對CaCO3的使用濃度進行了實驗，分別有0g/L?CaCO3、2g/LCaCO3、4g/L?CaCO3、6g/L?CaCO3、8g/L?CaCO3、10g/L?CaCO3，發酵P2培養基、細菌OD600的測定、取樣方法、丁醇、丙酮、乙醇、乙酸、丁酸的分析方法同步驟(1)。
4.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(1)中1％buffer包括50g/L?KH2PO4、50g/L?K2HPO4、220g/L乙酸銨，1％Vitamin包括0.1g/L對氨基苯甲酸、0.1g/L硫胺素、0.001g/L生物素；1％Mineral包括20g/L?MgSO4·7H2O、1g/L?MnSO4·H2O、1g/L?FeSO4·7H2O、1g/L?NaCl。
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