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[發明專利]HIV重組融合抗原及其表達基因和制備方法有效

專利信息
申請號: 201110389340.4 申請日: 2011-11-29
公開(公告)號: CN102492041A 公開(公告)日: 2012-06-13
發明(設計)人: 王繼華;周臘梅;唐時幸 申請(專利權)人: 廣州萬孚生物技術有限公司
主分類號: C07K19/00 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C12N15/70;G01N33/569;C12R1/19;C12R1/93
代理公司: 廣州華進聯合專利商標代理有限公司 44224 代理人: 萬志香;曾旻輝
地址: 510663 廣東*** 國省代碼: 廣東;44
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摘要:
搜索關鍵詞: hiv 重組 融合 抗原 及其 表達 基因 制備 方法
【說明書】:

技術領域

發明屬于醫藥生物領域,具體是涉及一種HIV重組融合抗原及其表達基因和制備方法。

背景技術

艾滋病(獲得性免疫系統缺陷癥,AIDS)是當今世界矚目的嚴重危害人類健康的病毒性疾病。引起艾滋病的主要病原是人I型和II型免疫缺陷病毒(HIV-1和HIV-2)。HIV感染者因免疫缺陷程度加深,從無癥狀攜帶者發展至嚴重免疫功能衰竭,導致多種致死性疾病的發展而死亡。根據WHO?2007年全球健康報告顯示,截止到2007年底全球HIV感染者估計為3320萬例,僅2007年全球新HIV感染者達270萬例。在發展中國家,由于經濟、文化和教育等多方面的原因,HIV的流行越演越烈,部分國家已失去對疾病流行的控制,而我國也趨于爆發性流行的前期階段。

HIV基因全長約9.8kb,含有gag、pol、env3個結構基因、2個調節基因(tat反式激活因子、rev毒粒蛋白表達調節子)和4個輔助基因(nef負調控因子、vpr病毒r蛋白、vpu病毒u蛋白和vif毒粒感染性因子)。HIV是一種變異性很強的病毒,各基因的變異程度不同,env基因變異率最高。

根據HIV基因差異,分為HIV-1型和HIV-2型。在HIV-1和HIV-2二型之間,其核苷酸序列只有40-60%的同源性。在HIV-1型內,各亞型之間的基因離散率是20%-35%、同一亞型內的基因離散率是7%-20%。

目前全球流行的主要是HIV-1,根據編碼包膜蛋白的env基因和編碼殼蛋白的gag基因序列的同源性,HIV-1型又進一步分為3個組,M亞型組(main即主要組)、O亞型組(outline即外圍組)和N亞型組(new,or?non-M,non-O新組或非M非O組),其中M組有A,B,C,D,E,F,G,H,I,J,K11個亞型。此外,近年來發現多個流行重組型。O組是1990年從喀麥隆和加蓬分離到的,與M組其他亞型的氨基酸序列只有50%的同源性。N組是最近才從兩名喀麥隆病人分離到的,在系統樹上,既不屬于M組,也不屬于O組的一組新病毒,故稱N組。

HIV-2的生物學特性與HIV-1相似,但其傳染性較低,引起的艾滋病臨床進展較慢,癥狀較輕。HIV-2型至少有A,B,C,D,E,F,G7個亞型。

我國以HIV-1為主要流行株,已發現的有A、B(歐美B)、B’(泰國B)、C、D、E、F和G8個亞型,還有不同流行重組型。1999年起在部分地區發現并證實我國有少數HIV-2型感染者。及時發現并鑒定HIV各種亞型對于追蹤流行趨勢、及時做出診斷、開發新的診斷試劑和新藥研制、疫苗開發均具有重要意義。

HIV感染的實驗室檢測在HIV感染的診斷、疾病進展的監測、抗病毒療效觀察和耐藥性監測中至關重要,對疾病流行的控制也有重大意義。HIV的診斷分篩查階段和確認試驗,各種診斷試劑主要是用免疫方法檢測血清或體液中的HIV特異的抗體如gp41或gp36抗體和HIV-1的P24抗原。

現在對HIV的檢測方法主要是使用血清學方法,用酶聯免疫吸附實驗ELISA檢測病人血清中的HIV抗體進行初篩,再用免疫印跡實驗進行確認,核酸檢測作為一種補充,在診斷HIV陽性母親所生嬰兒和處于HIV抗體窗口期的感染者發揮重要作用,但由于HIV的高度變異性,各亞型的抗原決定簇部位刺激機體產生特異性抗體可有一定差異,可以產生不同的抗原抗體反應,有報道表明,O組的HIV感染者血清與現有的HIV診斷試劑反應很弱出現很多假陰性結果,法國巴斯德研究所L.Montagnier也報道他們的一例1990年感染1992年死亡的O組HIV引起的艾滋病病例,正是由于用常規試劑難于檢出而造成。雖然O亞型在最近幾年通過向抗體檢測初篩試劑和確認試劑中加入合成肽,HIV-1的O組可被檢測出來,但其敏感性仍有待進一步的觀察,因為HIV任何變異所造成的抗原結構細微改變都可能影響其敏感性。同時,由于現有的無論是血清學檢測試劑還是核酸檢測試劑都是以流行于歐美的B亞型病毒株為基礎的,其對非B亞型毒株檢測的敏感性有待進一步證實,有研究報道表明,在抗體陽轉期間,應用取自B亞型抗原的抗體檢測初篩試劑盒可發現在檢測非B亞型時敏感性較低。并且,目前所用的幾種用于檢測核酸的試劑盒,在檢測非B亞型HIV-1感染者時,或者不能檢測,或者不能正確定量病毒量。對HIV-2型和HIV-1的0組尚不能定量檢測其病毒RNA。因此,提高現有檢測試劑盒檢測各亞型的敏感性和研制能定量檢測HIV-2型和HIV-1型中的O組病毒的試劑盒應是當務之急。

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