[發明專利]一種花生四烯酸的微生物發酵方法

有效

• 申請號: 201110389167.8
• 申請日: 2011-11-30
• 公開（公告）號: CN102373244A
• 公開（公告）日: 2012-03-14
• 發明（設計）人: 陳金卿;陳俊煌;林超;吳美瓊
• 申請（專利權）人: 廈門金達威集團股份有限公司
• 主分類號: C12P7/64
• 分類號: C12P7/64;C12R1/645
• 代理公司: 廈門原創專利事務所 35101
• 代理人: 陳建華

1.一種花生四烯酸的微生物發酵方法，其步驟如下：

（1）產花生四烯酸普通被孢霉發酵固料種子培養

（ⅰ）菌種活化：采用斜面菌種活化，試管斜面培養基為PDA固體培養基，將產花生四烯酸的普通被孢霉菌種接于PDA斜面，24~26℃培養2~3天；

（ⅱ）固料種子培養基的制備：

固料培養基，包含液體組分與固料組分，其中液體組分包括：葡萄糖?7~10?g/L，酵母粉?0.5~1?g/L，蛋白胨?1~5?g/L，NaNO₃?0.3~1.0?g/L，KH₂PO₄?0.1~1.0?g/L，維生素B_1?1~3μg/L，維生素K?1~3μg/L，維生素A?1.5~2.0?μg/L，CuSO₂·5H₂O?0.6~1.5?μg/L，MnSO_4?0.5~1.5?μg/L，ZnSO₄·7H₂O?1.2~1.8?μg/L，NaBr?0.44~0.66μg/L，pH?6.0~6.4之間；固料組分選擇麩皮、大米、小米中的一種或幾種，并與液體組分按10：7比例混合，80~100℃蒸煮20~30?min，晾干至散開不結團，按200g/瓶分裝進規格為1000mL的K氏瓶中，121℃滅菌30min；

（ⅲ）固料種子的培養：將新鮮斜面菌種加15~25mL無菌水洗下孢子，制成孢子懸液，倒入已滅菌固料培養基，輕搖使其盡量混勻，并于24~26℃培養2~3天，分別于12h和24h各搖勻一次，作為一級發酵的母種；

（2）發酵培養

（ⅰ）發酵培養基組分包括：葡萄糖20~25?g/L，酵母粉10~15?g/L，蛋白胨5~10?g/L，氯化鈉10~15?g/L，硫酸銨5~8?g/L，KH₂PO_4??3~6?g/L，CuSO₂·5H₂O?1.2~1.8?μg/L，MnSO₄?1.6~3.2?μg/L，ZnSO₄·7H₂O?2.4~3.5?μg/L，KNO_3?0.66~1.5?μg/L，NaBr?0.88~1.5?μg/L，pH?5.8~6.0，121℃滅菌30min；

（ⅱ）搖瓶發酵培養，即小樣發酵培養

以200～300ml無菌水洗下固料種子表面的孢子制成孢子懸液，按體積百分比為5~10%接種量接入搖瓶發酵培養基，培養溫度為26~30℃，搖床轉速150~200r/min，培養3~5天；發酵結束后收集濕菌體，烘干后提取干菌體中的油脂進行氣相色譜檢測，檢測花生四烯酸收得率。