[發(fā)明專利]一種抑制蝴蝶蘭組織褐化的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110388193.9
• 申請日: 2011-11-30
• 公開（公告）號: CN103125380A
• 公開（公告）日: 2013-06-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 卞莉娉
• 申請（專利權(quán)）人: 江蘇美尚生態(tài)景觀股份有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種抑制蝴蝶蘭組織褐化的方法。

背景技術(shù)

蝴蝶蘭觀賞價(jià)值極高，素有“蘭花皇后”之美譽(yù)，倍受國內(nèi)外消費(fèi)者親睞。然而，蘭科植物種子非常細(xì)小，不含有為種子萌發(fā)提供營養(yǎng)的胚乳或其他組織，在自然條件下很難萌發(fā)，而且蝴蝶蘭為單莖氣生蘭，分株繁殖系數(shù)很低，所以組織培養(yǎng)是其主要的繁殖方式。在園林植物組織培養(yǎng)過程中褐化現(xiàn)象是普遍存在的，它與菌類污染、過度含水化(即玻璃化)并稱為植物組織培養(yǎng)的三大難題，而控制褐化比控制污染和玻璃化更加困難。蝴蝶蘭就是在組織培養(yǎng)過程中比較容易出現(xiàn)褐化現(xiàn)象的園林植物之一。褐變產(chǎn)物抑制了原球莖的啟動、生長和小苗的再生，嚴(yán)重時(shí)會導(dǎo)致整個(gè)外肢體變褐死亡，如何克服褐變是其組培快繁成功與否的關(guān)鍵，對蝴蝶蘭褐化的研究顯得十分迫切。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于克服上述現(xiàn)有技術(shù)之不足，提供一種操作簡單，抑制褐化效果好，為控制蝴蝶蘭組織培養(yǎng)中的褐變提供有效的解決方法。

按照本發(fā)明提供的一種抑制蝴蝶蘭組織褐化的方法采用的主要技術(shù)方案為：包括以下步驟：

取材，選取蝴蝶蘭種子萌發(fā)出的花梗為組織培養(yǎng)的外植體；

消毒，對外植體進(jìn)行清洗和消毒，70％酒精浸泡30s、0.5％的次氯酸鈉溶液浸泡10min；

培養(yǎng)，將消毒后的外植體放入培養(yǎng)基中，培養(yǎng)和觀察60天。

本發(fā)明提供的一種抑制蝴蝶蘭組織褐化的方法還具有如下附加技術(shù)特征：

所述培養(yǎng)基為MS(Murashige-Skoog)培養(yǎng)基、VW培養(yǎng)基、1/2MS培養(yǎng)基、1/4MS培養(yǎng)基和MS紙橋培養(yǎng)基，培養(yǎng)條件為培養(yǎng)條件為黑暗預(yù)處理培養(yǎng)10d，培養(yǎng)溫度為(25±2)℃。每升各基本培養(yǎng)基均加入激素6-芐氨基腺嘌呤(6-BA)：5mg和萘乙酸(NAA)：0.5mg。

所述MS(Murashige-Skoog)培養(yǎng)基組分為：大量元素，1.65g/LNH₄NO₃、1.90g/L?KNO₃、0.17g/L?KH₂PO₄、0.1807g/L?MgSO₄·7H₂O、0.332g/LCaCl₂(2H₂O)；微量元素，22.3mg/L?MgSO₄·4H₂O、6.2mg/L?N₃BO₃、8.6mg/LZnSO₄·7H₂O、0.83mg/L?KI、0.25g/L?Na₂MoO₄·2H₂O、0.025mg/L?CuSO₄·5H₂O、0.025mg/L?CoCl·6H₂O；27.8mg/L?FeSO₄7H₂O、37.3mg/L?Na₂-EDTA；維生素，肌醇100mg/L、煙酸0.5mg/L、L-甘氨酸2mg/L、VB6?0.5mg/L、VB10.1mg/L；蔗糖30g/L、瓊脂12g/L，以MS培養(yǎng)基作為參照。

所述VW培養(yǎng)基包括組分和附加成分，所述組分為KNO₃?525mg/L、NH₄SO₄500mg/L、KH₂PO₄?250mg/L、MgSO₄·7H₂O?250mg/L、Ca₃(PO₄)₂?200mg/L、MnSO₄·4H₂O?7.5mg/L、FeSO₄7H₂O?27.8mg/L、Na₂-EDTA?37.3mg/L、蔗糖20g/L、瓊脂18g/L，所述附加成分為活性炭(AC)(1-3)g/L和聚乙烯吡咯烷酮(PVP)(1-3)g/L，檸檬酸(100-300)mg/L和抗壞血酸(VC)(100-300)mg/L。

1/2MS培養(yǎng)基的組分為將所述的大量元素中的成分每升所加的質(zhì)量減小一半，其他元素不變。

1/4MS培養(yǎng)基的組分為所述的MS培養(yǎng)基中所添加的大量元素減少到四分之一，其他元素不變。