[發明專利]水稻胡麻葉斑病原菌的分子鑒定方法

無效

• 申請號: 201110383736.8
• 申請日: 2011-11-28
• 公開（公告）號: CN102399888A
• 公開（公告）日: 2012-04-04
• 發明（設計）人: 郭士偉;陳洪亮;彭陳
• 申請（專利權）人: 江蘇省農業科學院
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/04
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種利用18S?rDNA和ITS長度和序列特征鑒別胡麻葉斑病原菌的方法，包括如下步驟：

(1)從待鑒定的真菌樣品中提取基因組DNA。

(2)以步驟(1)提取到的DNA樣品為模板，用針對胡麻葉斑病原菌18S?rDNA和ITS的專用引物進行聚合酶鏈式反應擴增得到待鑒定真菌的18S?rDNA和ITS片段產物。擴增18S?rDNA的正向引物P1為：5′-GTA?GTC?ATA?TGC?TTG?TCTC-3′，反向引物P2為：5′-TCC?GCA?GGT?TCA?CCT?ACGGA-3′。擴增ITS的正向引物P3為：5′-TCC?GTA?GGT?GAA?CCT?GCGC-3′，反向引物P4：5′-TCC?TCC?GCTTAT?TGA?TATGC-3′。在50μL的反應體系中完成擴增反應，以雙蒸水代替模板DNA作空白對照。

(3)如果步驟(2)能獲得擴增產物，將擴增反應得到的產物進行瓊脂糖凝膠電泳。純化含有擴增產物的電泳條帶。

(4)將步驟(3)純化后的18S?rDNA和ITS產物直接進行測序，得到待鑒定的真菌樣品的18S?rDNA和ITS的核苷酸序列。

(5)將步驟(4)獲得的核苷酸序列與SEQ?ID?NO.1和SEQ?ID?NO.2中的核苷酸序列進行對比，如果吻合，則待鑒定真菌判斷為胡麻葉斑病原菌。