[發明專利]一種淋巴道高轉移活性的胰腺癌細胞系

有效

• 申請號: 201110383666.6
• 申請日: 2011-11-26
• 公開（公告）號: CN103131667A
• 公開（公告）日: 2013-06-05
• 發明（設計）人: 龍江;虞先濬;徐近;劉辰;張波;羅國培;劉亮;徐永峰;倪泉興
• 申請（專利權）人: 復旦大學附屬腫瘤醫院
• 主分類號: C12N5/09
• 分類號: C12N5/09;C12Q1/02;C12R1/91
• 代理公司: 上海元一成知識產權代理事務所(普通合伙) 31268
• 代理人: 吳桂琴

1.一種具有淋巴道高轉移活性的人胰腺癌細胞株，其特征在于，所述細胞的分類命名：淋巴道高轉移活性人胰腺癌細胞系BxPC-3-LN，保藏編號：CGMCC?No.5421，保藏日期：2011年10月28日，其生物學特征為：(1)形態：兩維培養狀態下，細胞呈不規則的圓形，貼壁生長，接觸抑制消失；掃描電鏡檢測細胞形態明顯異性，具大量絨毛樣結構，伴有板狀偽足、絲狀偽足和不規則的細胞突觸；投射電鏡檢測細胞核漿比例失調，細胞核仁大，細胞器豐富，以線粒體和吞噬小體為多；(2)倍增時間36個小時，增殖速度快于母系細胞；(3)BxPC-3-LN細胞G1期57.6％，S期23.9％，G2-M期18.7％；(4)BxPC-3-LN細胞遷移和侵襲力強于母系細胞，粘附力較母細胞低；(5)BxPC-3-LN原位成瘤能力強于母細胞。

2.按權利要求1所述的具有淋巴道高轉移活性的人胰腺癌細胞株，其特征在于，所述細胞株其源細胞是人胰腺癌BxPC-3細胞系株ATCC號：CRL1687。

3.按權利要求1所述的具有淋巴道高轉移活性的人胰腺癌細胞株，其特征在于，所述的BxPC-3-LN細胞的原位成瘤10周后，其淋巴結轉移的發生率為100％。

4.按權利要求1所述的具有淋巴道高轉移活性的人胰腺癌細胞株，其特征在于，所述細胞株其表達的基因TIMP1、ADRM1、RHOF、FLOT2和FLNA明顯上調，其表達的基因ROBO1、ADH1C、CDH6、PCDH20和PCDH7下調。

5.權利要求1所述的具有淋巴道高轉移活性的人胰腺癌細胞株的篩選和建立方法，其特征在于，其包括步驟：

1)構建裸小鼠人胰腺癌細胞株BxPC-3淋巴道自發性轉移模型

(1)裸小鼠6只，分別在右后肢爪墊皮下接種1×10⁷個對數生長期BxPC-3細胞；

(2)8-10周后待原位移植瘤最大徑＞2cm，時處理裸小鼠，取淋巴結轉移灶組織，制成單細胞懸液，200目篩洗濾收集細胞培養；

(3)將步驟(2)獲得的細胞接種到另外6只實驗裸鼠，接種部位和細胞數與步驟(1)相同；

(4)反復上述步驟6次，建立淋巴道轉移模型；

2)單細胞克隆技術分離淋巴結轉移亞系

(1)將上述連續傳代法獲得的淋巴結轉移灶組織，分組培養，分別作為母系細胞；

(2)細胞培養：BxPC-3淋巴轉移目細胞在37℃，5％CO₂條件下，在含10％小牛血清的RPMI1640培養液中培養，待細胞滿瓶底時進行傳代；

(3)有限稀釋法稀釋細胞使其密度等于或少于10個細胞/ml；

(4)加入96孔培養板，培養，挑選只含一個細胞的孔擴增、標記、保存；

3)細胞建系

(1)測定單細胞克隆株電泳率；

(2)流式細胞儀檢測單細胞克隆株的細胞周期；

(3)腫瘤細胞克隆形成試驗；

(4)細胞克隆株穩定性實驗，連續傳代30次后特性仍穩定，獲得淋巴道高轉移活性人胰腺癌細胞系BxPC-3-LN。

6.權利要求1所述的具有淋巴道高轉移活性的人胰腺癌細胞株在篩選抗胰腺癌轉移藥物中的用途。