[發明專利]一種結合態微囊藻毒素的檢測方法

有效

• 申請號: 201110383133.8
• 申請日: 2011-11-25
• 公開（公告）號: CN102507797A
• 公開（公告）日: 2012-06-20
• 發明（設計）人: 孫秀蘭;李雪;張銀志;周偉杰;鈕為民;劉萍
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/08
• 代理公司: 北京匯信合知識產權代理有限公司 11335
• 代理人: 王秀麗

1.一種結合態藻毒素的檢測方法，步驟如下：

1)收集破碎后生物體組織的上清液，上清液分成兩份，其中一份添加蛋白酶處理，另一份為空白；

2)步驟1)中兩種上清液分別經過純化、濃縮，定容待測；

3)采用液質聯用的方法分別測定步驟2)中樣品的藻毒素含量；

4)酶法處理后樣品中藻毒素含量減去空白樣品中藻毒素含量得到結合態藻毒素的含量。

2.如權利要求1所述方法，其特征在于，所述蛋白酶為胃蛋白酶和胰蛋白酶組成的酶液。

3.如權利要求1或2所述方法，其特征在于，步驟1)所述方法，具體為：稱取鯽魚肌肉組織鮮樣，于玻璃勻漿器勻漿后添加10ml?20％甲醇溶液于下超聲破碎5min，超聲破碎儀功率設置為75％，然后在12000r/min下離心10min，移取上清液至干凈容器中避光保存，再重復提取兩次，合并得溶液，置于50ml離心管中；將其中一份作為空白置于22攝氏度下避光保存8h，另一份樣品中添加10ml含胃蛋白酶和胰蛋白酶的碳酸鉀溶液，每毫升碳酸鉀溶液中包含5mg胃蛋白酶和5mg胰蛋白酶，處理后同樣置于22攝氏度下避光保存8h。

4.如權利要求1或2所述方法，其特征在于，步驟2)所述方法，具體為：將兩份樣品溶液加入已預先活化的強陽離子交換固相萃取柱C18中進行富集，待富集完畢后，用20％的甲醇淋洗，最后用5ml100％色譜甲醇溶液洗脫，洗脫液收集于圓底燒瓶中，于旋轉蒸發儀上蒸發至1ml，定容待測。